抗肺癌合剂对lewis肺癌的抑制作用及vegf表达的影响

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1、抗肺癌合剂对Lewis肺癌的抑制作用及VEGF表达的影响林洁（山东临沂罗庄中心医院山东临沂276017）【中图分类号】R734.2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）8-0044-02【摘要】目的研究抗肺癌合剂对Lewis肺癌的抑瘤作用及对肿瘤组织VEGF表达的影响。方法将接种成功后Lewis肺癌细胞的小鼠随机分为模型组、抗肺癌合剂低、中、高剂量组、环磷酰胺组。处死后，测量瘤重、计算抑瘤率及肿瘤组织中血管内皮生长因子表达。结果抗肺癌合剂高剂量组和中剂量组与模型组有显著性差异（P<0.05）;高剂量组和中剂量组与模型组有显著性差异（

2、P<0.05）。结论抗肺癌合剂能降低Lewis肺癌小鼠肿瘤组织VEGF表达，抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤生长。【关键词】抗肺癌合剂肺癌抑瘤率血管内皮生长因子肺癌是当前世界各地最常见的恶性肿瘤之一，居各种恶性肿瘤的首位。有效治疗肺癌，降低死亡率，减少病人痛苦，提高患者的生存质量是医学界急需解决的重要课题之一。中医药治疗肿瘤是我国的特色和优势，抗肺癌合剂是中医药治疗肺癌的特色复方。为进一步探讨其对肺癌的抑制作用和作用机制，木文通过实验研究从实验动物和分子角度进行探讨。1材料与方法1.1实验动物SPF级C57BL/6近交系小鼠50只，雌雄各半，体重（18.64

3、±1.92）g,由山东省实验动物中心提供；Lewis肺癌瘤源小鼠由中国中医研宄院实验动物中心提供。1.2药品与仪器抗肺癌合剂（中药制剂）水提取液，分为高剂量组（含生药3g/mL）,中剂量组（含生药1.5g/mL）、低剂量组（含生药0.75g/mL）；配制浓度为2mg/ml的注射用环磷酰胺（CTX）。小鼠抗鼠血管内皮生长因子（VEGF）单克隆抗体、PowerVisionTMTwoStep免疫组化检测试剂盒、ZLI-9O32浓缩型DAB试剂盒（北京中杉公司）。切片机；电子天平；LeicaQwinStd自动图象分析系统；显微镜。1.3方法1.3.1动

4、物模型制作及分组参照文献方法造模［1】，取接种Lewis肺癌细胞10d的瘤源小鼠3只，脱颈椎处死，取新鲜肿瘤组织剪碎，置于匀浆器中研磨，经胰蛋白酶消化5min后并以过2000滤膜滤，置于冰上，稀释成13的瘤竿细胞悬液。吸取细胞悬液约20μl置于无菌试管内，稀释100倍后加0.2%台盼兰染色，吸取少许置于细胞计数板上在显微镜下计算活细胞数。调整细胞悬液浓度为l×107个瘤细胞/ml。50只C57BL/6小鼠右腋皮下各接种瘤细胞悬液0.2ml。接种24h后，将小鼠随机分成5组，每组10只：模型组、抗肺癌合剂高剂量组、抗肺癌合剂中剂量组、抗肺癌合

5、剂低剂量组、环磷酰胺组。1.3.2给药方法次曰给药，抗肺癌合剂高、中、低剂量组给药剂量为每天分别予相当于生药120g/kg、60g/kg和30g/kg的抗肺癌合剂灌胃给药；模型组每天以生理盐水灌胃，剂量为0.4ml/10g；CTX组每周3次注射CTX,给药剂量为20mg/kg/天［2］。给药吋间：均连续给药14d。1.3.3抑瘤效应的测定第15天各组小鼠处死后，剥取移植瘤块，于分析天平称重。抑瘤率=（1一实验组瘤重/模型组瘤重）×100%。1.3.4VEGF水平测定用中性甲醛固定肿瘤组织，制作病理切片，按照免疫组化检测试剂盒方法进行两步法染色。对

6、免疫组化染色切片细胞浆表达的VEGF进行定量分析，按其染色强度进行光密度测定。积分光密度=平均光密度×阳性面积。1.3.5统计学方法用SPSS17.0统计软件分析处理，实验数据以均数&plUSmn;标准差（x-±s）表示，组间比较用方差分析。2结果各组小鼠瘤重、抑瘤率、VEGF水平比较见表1。与模型组比较，抗肺癌合剂高剂量组、中剂量组及CTX组肿瘤明显缩小。抗肺癌合剂高剂量组抑瘤平均瘤重与模型组间奋显著差异(P<0.01),VEGF表达显著降低(P<0.05),中剂量组平均瘤重、VEGF表达与模型组间有显著性差异(P&l

7、t;0.05);低剂量组平均瘤重、VEGF表达与模型组无显著性差异(P>0.05)。表1各组小鼠平均瘤重、抑瘤率、VEGF水平比较(x-±s,n=10)注:与模型组相比，△P<0.01，*P<0.05o3讨论国外治疗肺癌普遍采用四种手段：手术治疗、放射治疗、化学药物治疗以及免疫治疗，但对于机体或多或少造成损害。而中医药既重视机体整体状况,又着眼于肿瘤局部表现，能扶正抗癌，又能防复发转移，是治疗肺癌的新突破。本研究采用的抗肺癌合剂，方中既以清热解毒治其实，又以益气养阴治其虚，辅以健脾和胃之功，祛邪而不伤正，标本兼顾，体现中医辨证

8、论治的原则。研究表明，抗肺癌合剂能抑制肿瘤生长与转移