参蓉肺康散影响lewis肺癌小鼠vegf表达的实验研究

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1、参蓉肺康散影响Lewis肺癌小鼠VEGF表达的实验研究卫强刘洪星迟文成金岩姜家康(黑龙江中医药大学附属第一医院)【中图分类号】R-33【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)25-0321-03【摘要】目的研宄参蓉肺康散对小鼠Lewis肺癌抑制作用及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法建立小鼠lewis肺癌模型并随机分组，分別给予不同处理，比较各组瘤体生长的重量，应用免疫组化法比较观察VEGF在各组中的表达。结果参蓉肺康散对C57BL/6小鼠的Lewis肺癌的瘤体生长有一定的抑瘤作用，抑制小鼠lewis肺癌VEGF表达作用，其与顺铂的单独治

2、疗作用相差不明显，而当其与化疗药物顺铂的抑瘤作用有相加效果。结论参蓉肺康散可通过抑制lewis肺癌小鼠VEGF表达以抑制肿瘤牛.长。【关键词】参蓉肺康散lewis肺癌VEGF免疫组化法传统医学认为肿瘤的发病机制为气阴先虚，脏腑功能失调，邪毒乘虚而入，肺气郁结，宣降失司，气机不畅，气滞血瘀，阻塞络脉，津液输布不利，壅结为痰，痰瘀交阻，从而形成肺癌肿块，参蓉肺康散即是针对此病机而研制的方药，经过L＜期临床观察取得了较好的疗效，该方能够改善患者生活质量，促进肿瘤病灶稳定，减少转移发生，同时能为化疗增效。为了进一步研宄参蓉肺康散的抗肿瘤作用机制，我们选用Lewis肺癌荷瘤小鼠

3、模型,观察该方及与化疗药物顺粕(DDP)合用对肿瘤的抑制作用。1材料与方法1.1〔5781_/6雄性小鼠,体重(18-20)g,由哈尔滨医科大学实验动物中心提供。Lewis肺癌荷瘤小鼠购自长春肿瘤研究所。1.2药物顺铂(DDP)20mg/支，山东齐魯制药有限公司生产，批号：7050172DC。参蓉肺康散：1.75g/装，黑龙江省久久药业特制提供。其主要成分为西洋参、肉苁蓉、黄芪、沙参、麦冬等经特定的制备工艺和流程提纯制成。生理盐水：500ml,哈尔滨制药六厂生产。1.3试剂和设备用超浄工作台SW-GIF:中国苏州净化设备厂；超低温冰箱MDF-328:日本三洋公司；超薄

4、切片机：日本OLYMPUS公司；透射电子显微镜：H-600日本日立公司；电子分析天平：AB-204-N梅特勒托利多冇限公司；兔抗鼠Fas多克隆抗体/兔抗鼠FasL多克隆抗体/兔抗鼠VEGF多克隆抗体：美国SantaCruzBiotech公司产品；SP试剂盒：美国Zymed公司产品；DAB显色试剂盒：武汉博士德公司；PV–6001/6002/6003二步法免疫组化检测试剂及浓缩型DAB试剂盒均购自中杉金桥。1.4Lewis肺癌模型制备将Lewis肺癌荷瘤小鼠后脱颈处死，在超浄工作台上分离瘤体，将实体瘤部分放入75%酒精浸泡消毒10min后，取生长良好、无坏死

5、的肿瘤组织，用生理盐水洗浄后剪碎加生理盐水研磨，过3000尼龙网制成单细胞悬液。将6周龄的C57BL/6小鼠四肢固定于操作台上；取小鼠两前腋窝连线下0.5cm，脊柱正中线右侧旁开0.3cm处为进针处；进针方向指向右前腋窝，进针深度0.5cm,注射0.2ml瘤细胞悬液。1.5实验分组及给药方法方法：将175只C57BL小鼠随机分为7组即空白组、对照组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组、顺铂（DDP）组、中药+顺铀组，（除空白组其余小鼠均接种Lewis肺癌细胞，建立lewis肺癌模型）每组25只。空白组与对照组不给任何药物；低剂量中药组：给予0.438g/kg参蓉

6、肺康散灌胃；中剂量中药组：给予0.875g/kg参蓉肺康散灌胃；高剂量中药组:给予1.75g/kg参蓉肺康散灌胃;顺铂组：腹腔注射3mg/kgDDP,中药+顺铂组:给予0.875g/kg参蓉肺康散灌胃、腹腔注射3mg/kgDDP。（中药组每曰灌胃1次每次0.2ml,连续14d;顺铂组于接种后第2天起隔日腹腔注射一次每只0.3ml,共7次；中药4•顺铂组：于接种后第2天起隔日腹腔注射DDP+中药灌胃一次，共7次。）1.6观察指标1.6.1计算抑瘤率［1］接种14天后脱颈椎法处死动物，完整剖取肌肉上接种的瘤块，用电子天平称取重量，用中性福尔马林固定备用，按公式:抑瘤率=(

7、对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100%，计算抑瘤率。1.6.2用免疫组化法检测VEGF表达肿瘤组织用福尔马林固定12h后，石蜡包埋待用，严格按说明书操作，测定血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达情况。肿瘤组织VEGF表达利用非生物素二步法免疫组化染色；以PBS代替一抗作为阴性对照。蛋白表达的定量结果在高倍镜下(×400>计算阳性细胞阳性面积的百分比(％),每张切片随机选取5个视野，求平均值。VEGF蛋白表达阳性判断标准综合文献［2】的报道A:染色强度：阴性0分，浅棕色1分，棕黄色2分，深棕黄色3分；B阳性细