高效液相色谱法测定金银花提取物中绿原酸的含量.doc

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1、高效液相色谱法测定金银花提取物中绿原酸的含量作者：刘磊何再安余子川刘超英刘焱文【摘要】目的建立金银花提取物中绿原酸含量的HPLC测定方法。方法国产C18柱（4.6mm×250mm,7μm）;流动相为乙腈：0.4%磷酸（12∶88）；检测波长为327nm；流速1ml·min-1；进样量10μl；柱温25℃。结果绿原酸在0.0716～0.6444μg范围内线性关系良好，r=0.9996；平均回收率99.99%，RSD=1.61%（n=6）。结论该方法简便、快速、准确，可用于金银花提取物的含量测定及质量控制。【关键词】金银花提取物

2、；绿原酸；高效液相色谱法AbstractObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofChlorogenicacidintheextractofFlosLonicerae.MethodsThechromatographicconditionswereasfollows:C18chromatographiccolumn(4.6mm×250mm,7μm)，amobilephaseofacetonitrileand0.4%H3PO4(12:88)，thedetectionwavel

3、engthat327nmandtheflowratebeing1ml·min-1.ResultsAlinearityofChlorogenicacidintheextractwasobtainedintherangeof0.0716～0.6444μgr=0.9996(n=6).Theaveragerecoverywas99.99%andRSD=1.61%(n=6).ConclusionThismethodiseasy,sensitiveandaccurateforthedeterminationofChlorogenicac

4、idintheextractofFlosLonicerae.KeywordsChlorogenicacid;HPLC;Determination金银花FlosLonicerae又名忍冬、双花，为临床常用中药,具有清热解毒、凉散风热之功效，主治痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等［1］。在中成药中，金银花或以细粉直接入药，或以提取物的形式入药，但大部分制剂以后者的形式入药，但即使以后者入药，也有两种形式，一是以全草直接投料,煎煮入药，即以煎煮液(即药材的提取液)作为半成品(中间体)；另一种是先提取有效部位，而后

5、以提取物投料，即以提取物作为中间体(原料)（刘艳娥《第二军医大学硕士学位论文》）。为了有效控制金银花提取物（中间体）的内在质量，本实验参考了有关文献［2，3］及2005版《中国药典》［4］方法，采用高效液相色谱法测定金银花提取物中绿原酸含量。1仪器与试药Agilent1100series高效液相色谱仪（G1322A排气阀，G1311A泵，G1316A柱温箱，G1314A紫外检测器），chemistation色谱工作站，Kromasil3C18色谱柱，超声提取器（KQ3200DE型数控超声仪昆山市超声仪器有限公司）；绿原酸对照

6、品(中国药品生物制品鉴定所，批号110753-200212)，金银花提取物（本实验室自制），乙腈，磷酸均为分析纯；水为双蒸水。2方法与结果［5］2.1分析方法的建立——分离及检测条件的选择2.1.1色谱条件色谱柱为国产KromasilC18柱（250mm×4.6mm，7μm）；柱温25℃;流动相为乙腈-0.4%磷酸(12∶88)；流速为1ml·min-1；检测波长327nm。2.1.2pH值对峰形的影响绿原酸属于有机酸类物质，在HPLC测定时易发生前沿或拖尾峰，流动相加入酸可以改善这种现象。本实验比较了水、乙酸、磷酸对峰形的

7、影响，当选用0.4%磷酸时，可得到较好的色谱峰形。2.1.3色谱系统适应性实验在选定条件下，绿原酸和样品中其他组分可基线分离，绿原酸与其相邻色谱峰的分离度大于1.5，理论塔板数（N）为5000以上。结果见图1。a-对照品b-供试品图1金银花提取物HPLC图谱2.2对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每毫升含35.8μg的溶液，即得。2.3供试品溶液的制备精密称取本提取物10mg，置100ml容量瓶中，双蒸水溶解，超声2min后，再用双蒸水定容至刻度，摇匀，过0.45μg微孔滤膜，取续滤液即

8、得。2.4线性范围的考察及其标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液2，4，6，10，14，18μl，分别注入液相色谱仪。按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值（A）对进样量进行回归，得回归曲线方程：Y=2468.4X-16.205，r=0.9996。结果表明，绿原酸在0.0716～0.6444