子痫前期外周血免疫相关基因的差异表达.doc

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1、子痫前期外周血免疫相关基因的差异表达作者：孙波郑桂琴赵卫华高素清张为远【摘要】目的了解子痫前期患者外周血免疫相关基因的差异表达，探索其与子痫前期发病的关系。方法选择4例重度子痫前期患者为研究对象，以4例正常妊娠妇女为对照，应用基因芯片技术检测两组孕妇外周血差异基因表达谱，了解子痫前期外周血免疫相关基因的异常表达。结果在所检测的21000个基因中，出现2次重复一致差异表达的免疫相关基因共有33个，子痫前期组差异表达上调基因23个，下调基因10个。结论免疫相关基因的差异表达可能是子痫前期发病的原因之一。【

2、关键词】子痫前期差异表达寡核苷酸序列分析基因免疫　【Abstract】ObjectiveToinvestigatethedifferentialexpressionofimmunity-relatedgenesinperipheralbloodleucocytesbetweenpreeclampsiaandnormalpregnancycases,andtoexplorethepathogenesisofpreeclampsia.MethodThedifferentialgeneexpressionf

3、ilesof4severepreeclampsiaand4normalpregnancycaseswerestudiedusingcDNAarraytechniqueinordertoidentifythedifferentialexpressionofimmunity-relatedgenes.Results33differentiallyexpressedimmunity-relatedgeneshadtheconcordanceinatleast2casesamongtotal21000gene

4、s.23geneswereup-regulatedand10weredown-regulated.ConclusionsDifferentialexpressionofimmunity-relatedgenesinperipheralleucocytesfrompreeclampsiamayberesponsibleforthemolecularmechanismofpreeclampsia.　　【Keywords】PreeclampsiaDifferentialexpressionOligonucl

5、eotidearraysequenceanalysisGeneImmunity　　子痫前期是一种常见的妊娠并发症，是导致孕产妇和围生儿死亡的重要原因之一，其病因及发病机制至今仍未完全阐明。已有的大量研究表明免疫因素在子痫前期的发病中起重要作用。作者自2007年7月至2008年7月应用基因微阵列技术对子痫前期外周血白细胞基因进行平行、大规模、高通量的分析，了解子痫前期患者外周血免疫相关基因表达的变化，以寻找差异基因与子痫前期发病机制之间可能的内在联系。现报告如下。　　1对象与方法　　1.1研究对象5　　

6、选择重度子痫前期患者4例为研究对象，子痫前期的诊断标准依照乐杰主编《妇产科学》第六版的标准。选择4例同期正常妊娠妇女为对照组，无妊娠期高血压病史及家族史。两组孕妇均为中国汉族妇女，单胎初孕妇，年龄、孕周、职业分布均衡，体重指数接近，无糖尿病、原发性高血压病史，无风湿、类风湿、红斑狼疮等自身免疫相关疾病，排除心、肝、肾及甲状腺疾病。　　1.2研究方法　　1.2.1外周血白细胞的分离　　提取病例组及对照组肘静脉新鲜全血15ml，立即用EDTA抗凝。离心弃去血浆后再加淋巴分离液，移液器收集界面上的白细胞层，

7、离心弃上清可见白色的沉淀，加入Trizol试剂，用移液器充分抽打、混匀，直到形成清亮不粘稠的液体。　　1.2.2细胞总RNA的抽提与鉴定　　Trizol法抽提细胞总RNA，样品经紫外分光光度计检测A230、A260、A280值，甲醛变性胶电泳检测28S、18S条带变化，鉴定样品质量是否符合表达谱芯片的实验要求。　　1.2.3对样品RNA进行荧光标记　　双链cDNA的合成与纯化，以cDNA为模板用随机引物和Klenow酶进行DNA链的标记，并在DNA链延伸过程中掺入荧光素。　　1.2.4杂交与清洗　　将

8、标记的DNA溶于杂交液中42℃杂交过夜，清洗后玻片甩干即可用于扫描。　　1.2.5信号扫描和分析　　芯片用ScanArrayExpress双通道激光扫描仪进行扫描，分别得到子痫前期外周血cDNA的Cy5图像文件和正常妊娠外周血的Cy3图像文件。采用GenePixPro4.0图像分析软件分析Cy3和Cy5两种荧光信号的强度和比值，对芯片上的数据用Lowess方法进行归一化；最后以差异为两倍的标准来确定差异表达基因。比值>2.0表示子痫前期外周血基因表