厄罗替尼对肺腺癌细胞凋亡的影响

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1、厄罗替尼对肺腺癌细胞凋亡的影响作者：白小燕牟晓燕姜淑娟王亚丽刘庆亮【摘要】目的研究厄罗替尼对人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡的影响以及对表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达的影响。方法采用MTT法检测不同浓度的厄罗替尼对A549细胞的增殖抑制作用;以倒置相差显微镜、流式细胞术、TUNEL法及DAPI荧光染色法检测细胞凋亡;以免疫荧光法分析厄罗替尼对EGFR蛋白表达的影响。结果厄罗替尼抑制A549生长呈时间浓度依赖性;厄罗替尼处理A549后倒置相差显微镜、DAPI及TUNEL均见到明显的凋亡细胞(P<0.05)

2、;药物处理组使细胞发生明显的G1期阻滞(P<0.05);TUNEL检测到200μmol/L厄罗替尼组细胞凋亡率为(42.13±1.4)%，显著高于对照组(0.82±0.03)%(P<0.05);免疫荧光法表明厄罗替尼明显下调EGFR表达(P<0.05)。结论厄罗替尼杀伤A549细胞的机制与介导细胞凋亡、阻滞细胞周期于G0/G1期及阻滞EGFR信号途径有关。【关键词】厄罗替尼;EGFR;A549细胞;细胞凋亡　　【Abstract】ObjectiveToexploretheeffectsofErl

3、otinibonapoptosisandexpressionofEGFRinhumanpulmonaryadenocarcinomacelllineA549cells.MethodsMTTassaywasusedtodetermineA549cellsproliferation.Invertedmicroscope,13flowcytometry,DAPIandTUNELwereusedtodetectapoptosis.TheexpressionofEGFRwasdeterminedbyimmunofluore

4、scence.ResultsErlotinibinhibitedthegrowthofA549cellsinadosedependentandtimedependent.ThecellstreatedwithErlotinibshowedatypicalapoptoticmorphology(P<0.05)andG1phasearrestting(P<0.05).Theapoptosisrateof200μmol/LErlotinibgroup〔(42.13±1.4)%〕wassignifican

5、tlyhigherthanthatofcontrolgroup〔(0.82±0.03)%〕(P<0.05).ImmunofluorescenceassayshowedthatErlotinibdownregulatedtheexpressionofEGFR.ConclusionsErlotinibcankillA549cells，owingtoinducingapoptosisandG1phasearrestinganddownregulatingtheexpresionofEGFR.　　【Keywor

6、ds】Erlotinib;EGFR;A549cell;Cellapoptosis13　表皮生长因子受体(EGFR)在多数恶性肿瘤中常呈过度表达，而在正常细胞中很少表达，多项研究表明40%～80%非小细胞肺癌(NSCLC)存在EGFR过表达〔1〕。EGFR过表达预示存活率低、预后差、转移可能性大，表明EGFR信号转导通路的活化是肿瘤发生的最基本机制〔2〕。因此，从理论上说，利用EGFR抑制剂来治疗EGFR表达阳性的肿瘤应该具有良好的应用前景。厄罗替尼是一种口服的EGFR酪氨酸激酶拮抗剂，通过阻断NSCLC细胞生存、

7、增殖中的某些信号转导通路而发挥作用〔3〕。本实验通过观察厄罗替尼在体外对A549细胞增殖、凋亡及EGFR蛋白表达的影响，探讨其作用机制，为厄罗替尼用于临床NSCLC的治疗提供实验依据。　　1材料与方法　　1.1细胞及主要试剂人肺腺癌细胞株A549由山东大学附属省立医院中心实验室提供，胎牛血清(FCS)购自杭州四季清公司，RPMI1640购自Gibco公司，二甲基亚砜(DMSO)、DAPI染液购自Sigma公司,厄罗替尼(Erlotinib，商品名特罗凯)由罗氏公司惠赠。EGFR兔抗人多克隆一抗购自奥博森公司，FI

8、TC标记羊抗兔IgG及DAB试剂盒购自北京中杉公司，AnnexinV/PI细胞凋亡检测试剂盒、细胞周期试剂盒购自晶美公司。TUNEL试剂盒购自美国罗氏公司。LabsystemsMutisKanAscent全自动酶标测试仪购自芬兰Labsystems公司,EPICSXL4型流式细胞仪购自美国Beckmancoulter公司。IX51倒置式基础型显微镜Olmpus购自日本