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时间:2018-08-01
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1、Nbn基因对出生后小鼠海马发育的影响【摘要】 目的通过观察神经特异性Nbn基因敲除(NbnCNSDel)和对照(NbnCNSCtr)小鼠海马发育的形态学变化,探讨DNA损伤修复基因Nbn在生后小鼠海马发育过程中的作用。方法应用光镜连续切片和体视学方法对生后(postnatalday,P)7、14、21d的实验组和对照组小鼠海马进行系统地形态学观察和定量分析。结果NbnCNSDel小鼠海马发育比NbnCNSCtr明显滞后,至P21d椎体层和齿状回(DG)颗粒层的截面面积均减小(P<0
2、.05),DG颗粒层和多形层及CA4区的体密度差异均有统计学意义(P<0.05)。结论DNA损伤修复基因Nbn是小鼠海马发育的一个重要基因,影响小鼠海马椎体层成熟和DG颗粒细胞的发育与成熟。【关键词】Nbn;小鼠;海马发育;体视学 ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheroleofneurospecificDNArepairgeneNbninmousehippocampusdevelopmentbyobservingthemorphologicaldifferenc
3、esinNbnCNSDelandNbnCNSCtrmice.MethodsSerialsectionsandstereologywereusedtoquantitativelyanalyzethedevelopmentofmousehippocampusonpostnatalday7,14and21.ResultsComparedwiththatofthecontrolgroup,thehippocampusdevelopmentofNbnCNSDelmicelaggedbehind.InNb
4、nCNSDelmice,onday21,the9profileareaofpyramidallayerofhippocampusandgranularlayerofdentategyrusdecreased(P<0.05),andthevolumedensitiesingranularlayerandpolymorphiclayerofdentategyrus,andCA4hadsignificantdifferences(P<0.05).ConclusionDNArepairgeneNb
5、n,animportantgeneinmousehippocampusdevelopment,affectsthedevelopmentandmaturationofhippocampusandgranularlayerofDGinmice. KEYWORDS:Nbn;mouse;hippocampusdevelopment;stereology Nbn(在人类称之为NBS)是一种重要的DNA修复基因,其表达的蛋白Nibrin参与DNA损伤修复[1],如小头畸形、智力发育延迟、组织退化、对DNA损伤剂
6、敏感、染色体不稳定、易患肿瘤等[23],都与DNA损伤修复密切相关。本研究应用光镜连续切片结合体视学方法对Nbn基因敲除(NbnCNSDel)和对照(NbnCNSCtr)小鼠海马发育进行系统观察和定量分析,了解其不同发育阶段的形态学变化,为进一步认识DNA损伤修复基因Nbn对小鼠海马发育的影响及其研究提供基本的实验依据。 1材料与方法9 1.1动物选择和标本制备 选用P7、14、21d的(129/SV×C57/BL/6)Nbn基因条件敲除的突变系[45]小鼠,每组6只,对照组取相应的同窝
7、仔鼠,雌雄各半,共36只,体重18~20g,以上动物提供及测交试验均由中国医学科学院实验动物中心支持完成。仔鼠经100mL/L水合氯醛麻醉后取出脑组织,沿矢状缝纵向切开,入40g/L中性多聚甲醛固定过夜,常规光镜标本制备,石蜡定向包埋,取连续矢状切片厚3μm,HE染色,光镜观察。 1.2体视学指标的测定 每个动物的脑组织等间隔选取切片,采用方格测试系统,点计数法,按公式AC=ΣPX·a2测算出海马椎体层和DG颗粒层的截面积,∑Px为方格系统落在同一海马组织块所有切片上的点数和,a为方格系统中每一小格的
8、边长,在10×10倍光镜下相当于实际长度0.01mm;按公式VV=PX/PC分别测算出海马椎体层、CA4区和DG区颗粒层、多形层的体密度,PX为方格系统落在所测结构的点数,PC为方格系统落在参照系的点数(均以各自的海马为参照系)[6]。 1.3统计学处理9 采用统计软件SPSS16.0对所测各项数据进行析因设计的方差分析和独立样本t检验,P<0.05为差异有统计学意义。 2结果 2.1光镜观察 海马结构(简称海
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