nbn基因对出生后小鼠海马发育的影响

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1、Nbn基因对出生后小鼠海马发育的影响【关键词】Nbn；小鼠；海马发育；体视学　　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheroleofneurospecificDNArepairgeneNbninmousehippocampusdevelopmentbyobservingthemorphologicaldifferencesinNbnSDelandNbnSCtrmice.MethodsSerialsectionsandstereologyentofmousehippoc

2、ampusonpostnatalday7,14and21.ResultsparedpusdevelopmentofNbnSDelmicelaggedbehind.InNbnSDelmice,onday21,theprofileareaofpyramidallayerofhippocampusandgranularlayerofdentategyrusdecreased(P<0.05),andthevolumedensitiesingranularlayerandpolymorphiclaye

3、rofdentategyrus,andCA4hadsignificantdifferences(P<0.05).ConclusionDNArepairgeneNbn,animportantgeneinmousehippocampusdevelopment,affectsthedevelopmentandmaturationofhippocampusandgranularlayerofDGinmice.　　KEYouse;hippocampusdevelopment;stereology　　Nbn(在

4、人类称之为NBS)是一种重要的DNA修复基因，其表达的蛋白Nibrin参与DNA损伤修复[1]，如小头畸形、智力发育延迟、组织退化、对DNA损伤剂敏感、染色体不稳定、易患肿瘤等[23]，都与DNA损伤修复密切相关。本研究应用光镜连续切片结合体视学方法对Nbn基因敲除(NbnSDel)和对照(NbnSCtr)小鼠海马发育进行系统观察和定量分析，了解其不同发育阶段的形态学变化，为进一步认识DNA损伤修复基因Nbn对小鼠海马发育的影响及其研究提供基本的实验依据。　　1材料与方法　　1.1动物选择和标本

5、制备　　选用P7、14、21d的(129/SV×C57/BL/6)Nbn基因条件敲除的突变系[45]小鼠，每组6只，对照组取相应的同窝仔鼠，雌雄各半，共36只，体重18～20g，以上动物提供及测交试验均由中国医学科学院实验动物中心支持完成。仔鼠经100mL/L水合氯醛麻醉后取出脑组织，沿矢状缝纵向切开，入40g/L中性多聚甲醛固定过夜，常规光镜标本制备，石蜡定向包埋，取连续矢状切片厚3μm，HE染色，光镜观察。　　1.2体视学指标的测定　　每个动物的脑组织等间隔选取切片，采用方格测试系统，点计数法，按公

6、式AC=ΣPX·a2测算出海马椎体层和DG颗粒层的截面积，∑Px为方格系统落在同一海马组织块所有切片上的点数和，a为方格系统中每一小格的边长，在10×10倍光镜下相当于实际长度0.01mm；按公式VV=PX/PC分别测算出海马椎体层、CA4区和DG区颗粒层、多形层的体密度，PX为方格系统落在所测结构的点数，PC为方格系统落在参照系的点数(均以各自的海马为参照系)[6]。　　1.3统计学处理　　采用统计软件SPSS16.0对所测各项数据进行析因设计的方差分析和独立样本t检验，P<0.05为差异有统计学

7、意义。　　2结果　　2.1光镜观察　　海马结构(简称海马)由海马(即CA区，由CA1、CA2～3和CA4组成)和DG构成。由外向内有分子层、椎体层和多形层三层结构，在大脑半球矢状切面上，呈双重“C”形环抱外形，大“C”即为海马，开口朝向腹内侧，小C代表齿状回，位于海马沟背内侧，开口向背外侧。主要由主细胞层和非主细胞层组成，主细胞层由位于海马的锥体层和DG的颗粒层组成,锥体层由锥体细胞组成,颗粒层由颗粒细胞组成,非主细胞层主要由神经纤维组成[78]。　　小鼠海马NbnSCtr组，P7～21d，均可见大

8、“C”形外形，结构已发育完全，各分区各层截面面积均随时间推移逐渐增大，海马椎体层细胞因分区不同而发育不同步，表现为CA2～3区细胞比CA1区分化早，分化程度好，分化速度快。此外，在同一区也有一定的规律：位置较深的细胞(近多形层)比较浅的(近分子层)分化早，且分化程度好，分化速度快；Nbn1SDel组与NbnSCtr组相比，P7～21d，大“C”外形和海马各区分层仍清晰可见，但截面面积明显减小约4倍；同时海马CA区还伴有