不同品种枇杷果实酚类物质及其抗氧化活性解析

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1、不同品种枇杷果实酚类物质及其抗氧化活性解析　　酚类物质是植物重要的次生代谢产物之一，广泛存在于植物中，影响植物的品质，由于酚类物质结构中携有一个或多个羟基，对自由基有良好的清除能力，表现出很强的抗氧化活性，因而植物酚类物质及抗氧化活性研究成为近年农业科研领域的热点，在枇杷叶、花、核、果已有相关报道。研究表酚类具体的组成及各成分含量与抗氧化能力有很高的相关性，在枇杷花、叶中也得到相同结果，枇杷果实中酚类的组成研究较少，仅张文娜、徐红霞等研究了浙江10个品种的枇杷果实酚类物质组成，其他品种尚未见报道。福建是枇杷

2、的主产区之一，2013年年产量达万吨，主栽的品种有红肉系的早钟6号、长红3号、解放钟和白肉系的白梨等，本实验以这4种枇杷果实为试材，采用超声波辅助乙醇提取法提取其中的酚类物质，用DPPH法(DPPH自由基清除法)和FRAP法(铁还原比色法)来评价其抗氧化能力，并使用高效液相色谱法分析酚类组成，研究不同品种果实酚类组成与抗氧化性关系，并与已研究较多的宁海白比较，以期为枇杷深加工提供科学依据。　　1材料与方法　　材料与仪器　　5种枇杷果实莆田市果树研究所提供，按成熟时间分为早熟的早钟6号，中熟的长红3号和宁海白

3、，中晚熟的白梨及晚熟的解放钟，果实于正常食用成熟度采收，当天运至实验室，选取成熟度一致、无虫害、无明显损伤、果实饱满的枇杷置于-70℃超低温冰箱冷冻保存待用;表儿茶酸、鞣花酸、咖啡酸、阿魏酸、绿原酸美国Sigma公司;新绿原酸、隐绿原酸、TPTZ(2，4，6-反式2-吡啶基三嗪)、DPPH(1，1-二苯基-2-三硝基苯肼)上海源叶生物科技有限公司;甲醇、乙腈色谱纯，国药集团化学试剂有限公司;其他试剂分析纯;实验用水超纯水。Agilent1100高效液相色谱仪美国Agilent公司采用紫外检测器ZORBAXS

4、B-C18色谱柱(150mmmm，5722-型可见分光光度计上海光谱仪器有限公司;KQ-100DE型超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司;KDC-40低速离心机安徽中科中佳科学仪器有限公司;Ultrapure超纯水机上海和泰仪器有限公司。　　实验方法　　枇杷果实酚类物质提取果实从冰箱取出去皮去核后，果肉迅速切成碎末，准确称取g，加入30mL70%乙醇溶液，浸泡1h，超声提取20min(温度30℃，功率200W)，再以5000g的转速离心20min，减压抽滤得到滤液，滤液用70%乙醇定容至50mL，即为枇杷果实

5、提取液，用于测定DPPH的清除能力和铁离子还原能力及浓缩后用于酚类物质分析。　　总酚含量测定采用Folin-Ciocaileu比色法测多酚含量，取1mL提取液加入20mL水，mLFoLin-CiocaLteu试剂，反应5min后加入mL饱和碳酸钠溶液，最后加水定容至50mL静置2h，于765nm波长处测定其吸光度。以没食子酸(GAE)为标样绘制标准曲线，根据标准曲线计算样品中总酚含量，结果以样品中含有的没食子酸当量(g/gFW)表示。　　提取液枇杷果实抗氧化能力的测试　　清除DPPH能力的测定参照文献加以修

6、改，DPPH乙醇溶液浓度为10-4mol/L，取等体积的DPPH溶液和枇杷提取液混合，室温避光反应30min后于517nm波长处测定其吸光度(Ai);等体积的DPPH溶液和乙醇混合，测溶液的吸光值(A0);等体积的提取液和乙醇混合，测溶液的吸光值(Aj)。记录A0，Ai和Aj，按下列公式计算清除率IP:IP(%)=[1-(Ai-Aj)/A0]100。　　铁离子还原力测定参照文献方法测试提取液FRAP值。取1mL提取液，稀释至25mL。取该稀释液1mL，加入mLFRAP工作液(20mmol/L三氯化铁溶液、3

7、00mmol/L醋酸盐缓冲液、10mmol/LTPTZ溶液按1∶10∶1配制)，加入6mL水，37℃下反应10min后测定593nm处的吸光度。以硫酸亚铁铵溶液为标样绘制标准曲线，以达到相同吸光度所需硫酸亚铁的量来计算样品FRAP值，单位为mmol/L。　　枇杷果实提取液的HPLC分析HPLC检测条件色谱柱:KromasilC18(150mmmm);进样量:20流速:mL/min;柱温:30℃;检测波长:280nm;流动相A:5%乙酸水溶液;流动相B:100%乙腈。梯度洗脱程序:0～25min时A从90%降

8、至70%，25～35min时A从70%升回至90%。　　酚单体的HPLC分析分别准确称取7种酚单体对照品，用色谱纯的甲醇溶解，配制成mg/mL的溶液，测定其保留时间。再配制各酚单体浓度为mg/mL的混合对照品溶液并逐级稀释，测定峰面积，计算得到浓度与峰面积的回归方程，溶液测试前过m的滤膜。　　样品的处理与分析取25mL的提取液减压蒸馏除去乙醇，再用正己烷萃取3次，通过减压蒸馏除去正己烷后，用甲醇定容到5mL，用于