人表皮生长因子hegf在大肠杆菌中的高效表达工艺研究

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1、人表皮生长因子hEGF在大肠杆菌中的高效表达工艺研究人表皮生长因子hEGF在大肠杆菌中的高效表达工艺研究王文杰广州大学生命科学学院摘要目的：为了提高hEGF（humanepidermalgrowthfactor）的产量，本次实验主要从培养基优化，IPTG诱导浓度和诱导时间的摸索等方面来提高重组大肠杆菌hEGF表达量，并进行了5L发酵罐的小试发酵研究。方法：采用摇瓶培养方式，先通过单因子实验从甘油，乳糖，葡萄糖三种碳源中选出两种效果显著的碳源作为混合碳源。从玉米浆，蛋白胨，酵母膏三种氮源中选出两种效果显著的碳源作为混合氮源。通过“四因素三水平”正交实验确定最佳

2、的培养基配方。并在此优化的培养基基础上进行IPTG浓度和诱导时间摸索。结果：单因子实验确定了乳糖和甘油作为有效的混合碳源，蛋白胨和酵母膏作为有效混合氮源，“四因素三水平”正交实验确定最佳的培养基配方（甘油1.5%，乳糖2%，蛋白胨0.5%，酵母膏1.5%，氯化纳1%）时表达量达到14.8%。同时，最佳的IPTG浓度为1.0μm/ml和最佳诱导时间为4h。5L发酵罐的小试发酵放罐时菌重（湿重）为42.3g/L，表达量为15.7%。关键词人表皮生长因子（hEGF）；大肠杆菌表达系统；培养基优化；发酵High-levelexpressionofrecombinat

3、ionhumanEGFinE.coliWangwenjieSchoolofLifeSciences，GuangzhouUniversityABSTRACTObjective:InordertotheyieldofhEGF,whichwasexpessedinrecombinantEscherichiacoli.Studiesincludeoptimizationofculturemedium,searchingforoptimizationconcentrationofIPTGandinductiontime,werecarriedout.Also,asma

4、ll-scalefermentationwascarriedoutin5Lfermentor.Methods:Tostudytheoptimalcultivationcondition,singlefactorandorthogonalexperimenthadbeencombinedtoresearchbyshake-flaskcultivate.Twokindsofcarbonsourceandnitrogensourcewasselectedfromlactose,glycerol,glucose,cornsteepliquor,peptoneandy

5、eastextractbysinglefactorscreenexperimentasmixedcarbonandnitrogensource.Then,theoptimizedformulaoftheculturemediumwasconfirmedthroughthe4-factorsand3-levelsorthogonalexperiment.Basedonthisoptimizationofculturemedium,theoptimizedconcentrationofIPTGandinductiontimewasinvestigated.Res

6、ults:Lactoseandglycerolwereselectedasmixedcarbonsource,peptoneandyeastextractwereselectedasmixednitrogensource.TheexpressionofhEGFreached14.8%attheoptimizedformulaoftheculturemediumglycerin1.5%,lactose2%,peptone0.5%,yeastextract1.5%,NaCl1%.Meanwhile,theresultshowedtheoptimizedconce

7、ntrationofIPTGis1.0mmol/Landtheoptimizedinductiontimeis4h.Finally,wetcellweightofrecombinantE.coliin5Lfermentorwashighas42.3g/L,andtheexpressionofhEGFreached15.7%.KEYWORDShEGF;E.coliexpressionsystem;Mediumoptimization；Fermentation目录1前言42材料与方法52.1实验材料5器52..1..2实验试剂62..1..3培养基及试剂配制62

8、.2实验方法8菌株的筛选8培养基筛选9诱导物IPTG