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1、人表皮生长因子hEGF在大肠杆菌中的高效表达工艺研究摘要目的：为了提高hEGF（humanepidermalgrowthfactor）的产量，本次实验主要从培养基优化，IPTG诱导浓度和诱导时间的摸索等方面来提高重组大肠杆菌hEGF表达量，并进行了5L发酵罐的小试发酵研究。方法：采用摇瓶培养方式，先通过单因子实验从甘油，乳糖，葡萄糖三种碳源中选出两种效果显著的碳源作为混合碳源。从玉米浆，蛋白胨，酵母膏三种氮源中选出两种效果显著的碳源作为混合氮源。通过“四因素三水平”正交实验确定最佳的培养基配方。并在此优化的培养基基础上进行IPTG浓度和诱导时间摸索。结果：单因子实验确定了乳糖和甘
2、油作为有效的混合碳源，蛋白胨和酵母膏作为有效混合氮源，“四因素三水平”正交实验确定最佳的培养基配方（甘油1.5%，乳糖2%，蛋白胨0.5%，酵母膏1.5%，氯化纳1%）时表达量达到14.8%。同时，最佳的IPTG浓度为1.0µm/ml和最佳诱导时间为4h。5L发酵罐的小试发酵放罐时菌重（湿重）为42.3g/L，表达量为15.7%。关键词人表皮生长因子（hEGF）；大肠杆菌表达系统；培养基优化；发酵第23页共23页High-levelexpressionofrecombinationhumanEGFinE.coliWangwenjieSchoolofLifeSciences，Gua
3、ngzhouUniversityABSTRACTObjective:InordertoimprovetheyieldofhEGF,whichwasexpessedinrecombinantEscherichiacoli.Studiesincludeoptimizationofculturemedium,searchingforoptimizationconcentrationofIPTGandinductiontime,werecarriedout.Also,asmall-scalefermentationwascarriedoutin5Lfermentor.Methods:To
4、studytheoptimalcultivationcondition,singlefactorandorthogonalexperimenthadbeencombinedtoresearchbyshake-flaskcultivate.Twokindsofcarbonsourceandnitrogensourcewasselectedfromlactose,glycerol,glucose,cornsteepliquor,peptoneandyeastextractbysinglefactorscreenexperimentasmixedcarbonandnitrogensou
5、rce.Then,theoptimizedformulaoftheculturemediumwasconfirmedthroughthe4-factorsand3-levelsorthogonalexperiment.Basedonthisoptimizationofculturemedium,theoptimizedconcentrationofIPTGandinductiontimewasinvestigated.Results:Lactoseandglycerolwereselectedasmixedcarbonsource,peptoneandyeastextractwe
6、reselectedasmixednitrogensource.TheexpressionofhEGFreached14.8%attheoptimizedformulaoftheculturemedium(glycerin1.5%,lactose2%,peptone0.5%,yeastextract1.5%,NaCl1%).Meanwhile,theresultshowedtheoptimizedconcentrationofIPTGis1.0mmol/Landtheoptimizedinductiontimeis4h.Finally,wetcellweightofrecombi
7、nantE.coliin5Lfermentorwashighas42.3g/L,andtheexpressionofhEGFreached15.7%.KEYWORDShEGF;E.coliexpressionsystem;Mediumoptimization；Fermentation第23页共23页目录1前言42材料与方法52.1实验材料52.1.1实验仪器52..1..2实验试剂62..1..3培养基及试剂配制62.2实验方法82.2.1高表达菌株的筛选82.2.2培养基筛选9
