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1、葛根素对糖尿病肾病大鼠内皮素表达的影响论文钟警，刘江华，王彩云，盛杰，刘锋，文龙【关键词】葛根素；,,糖尿病肾病模型；,,内皮素摘要：目的观察葛根素对糖尿病肾病内皮素表达的影响。方法利用链脲佐菌素腹腔注射法诱导建立1型糖尿病大鼠模型,将实验用SD大鼠随机分正常对照组、糖尿病组、葛根素治疗组。治疗12周，观察治疗期间及治疗后大鼠的一般状况、血糖、尿素氮、血肌酐，内生肌酐清除率、24h尿蛋白排泄率.freelalcontrolgroup,modelgroup,andPueraringroupfor12ent,thegeneralstate,bloodglucoselevels,b
2、loodureanitrogen,serumcreatinine,urinaryalbuminexcretionrateofthe24-hours，andclearancerateofcreatinine，asmunohistochemicaltechnologyindifferentgroups.Results①Diabetesmellitusandrenalfunctionlesionoccurredinthetodelgroups.②Puerarincouldimprovethegeneralstate,.freelcreatinine,andurinaryalbumi
3、nexcretionrateofthe24-hours,increaseclearancerateofcreatinine,theexpressionofendothelininthekidneyetime.ConclusionPuerarinhascertainprotectiveeffectonrenalfuntion.Keyodels;Endothelin糖尿病肾病(diabeticnephropathy，DN)是严重的常见糖尿病慢性微血管并发症，是造成终末期肾功能衰竭的最常见原因。若在肾病早期阶段进行有效干预治疗，有希望延缓甚至逆转糖尿病肾病的发展。内皮素(Endot
4、helin，ET)主要由内皮细胞产生，是目前已知作用最强和维持时间最持久的一种缩血管物质，是调节血管通透性的重要因子，是一种血管收缩和促有丝分裂肽，它在体内外均可影响肾脏结构和功能，已经有动物模型证实糖尿病与血浆和尿内皮素增高有关。此种增高很可能与糖尿病的特征性变化和肾损伤相关联，在糖尿病肾病早期病理变化的研究中是重要指征。多年研究证明，在糖尿病持续高糖状态下，体内氧化应激(oxidativestress)和非酶糖基化(糖基化)反应均很明显，在糖尿病肾病发病中起重要作用［1，2］，抑制氧化糖基化可能延缓或减轻糖尿病肾脏并发症，故我们拟以药物抑制糖基化和氧化应激两个方面为出发点
5、，结合葛根素（Puerarin）的作用机理，作者试用葛根素对模型糖尿病大鼠进行干预，以明确葛根素对糖尿病肾病发生、发展的影响，通过对糖尿病大鼠肾组织免疫组织化学的研究，观察葛根素对肾小球ET表达的影响，为扩大该药的临床应用范围提供实验依据。1材料与方法1.1动物雄性SD大鼠50只，2月龄，体重200~250g，清洁级；由湖南农业大学动物部提供。实验期间自由饮水，摄食饲料为中南大学动物中心提供的混合饲料，适应性喂养1周后进行实验。室温18~28℃，相对湿度62%~80%。1.2仪器与试剂怡成SENTEST手持式快速全血葡萄糖测试仪，日丽7170型自动生化，FJ-2008型免疫细
6、胞记数仪（国营二六二厂生产），葛根素［Puerarin，棕黄色粉末(纯度90%),由湖南金农生物资源股份有限公司提供］;S-P免疫组化染色试剂盒、兔抗鼠血管内皮生长因子(anti-Fibronectin,anti-ET）抗体由武汉博士德生物公司提供。链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ,Sigma,Co.USA);将0.1mmol/L柠檬酸钠缓冲液（pH4.5）配成0.45%之溶液，使用前经微孔滤过除菌。免疫组化染色载玻片洗净，干燥分别放入以1：10比例去离子稀释的多聚氨酸及多聚氨酸（含有1/1000DEPC）的溶液中，浸泡5min，60℃烤箱烘烤1h干燥，装盒，
7、备用。1.3方法1.3.1动物建模50只大鼠预养1周后，空腹12h，腹腔注射1%STZ-柠檬酸钠缓冲液（STZ60mg/kg体重）。对照组注射等量柠檬酸钠缓冲液，依据72h后尿糖+++~++++，静脉采血测血糖（怡成全血葡萄糖测试仪）血糖≥16.7mmol/L者，确定模型建立，纳入本实验。除去造模失败及死亡大鼠，将30只糖尿病鼠纳入本实验。1.3.2分组糖尿病鼠随机分为①正常对照组（组10只）；②糖尿病组（D组10只）；③葛根素治疗组（D+P组10只）。葛根素组每只腹腔注射葛根素80mg/(kgd)，均
