“dna 的粗提与鉴定” 实验教学的探索

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1、唯有努力方可成就，唯有惜时才能成功！题记：努力吧，年轻的鹰；奋斗吧，年轻的鹰；惜时吧，年轻的鹰：回忆往事的时候不为碌碌无为而羞耻，不为虚度年华而悔恨！“DNA的粗提与鉴定”实验教学的探索王重力　　辛　力新编高中生物教学大纲，增加了“DNA的粗提取与鉴定”等一些细胞学、生物化学基本方法的实验内容，我们利用课堂和课外的时间，初步对“DNA的粗提取与鉴定”这一实验进行了实验方案和课堂教学的探索。1　实验原理以蒸馏水作为低渗溶液，将新鲜鸡血细胞破裂，使其细胞核物质溶解于氯化钠溶液。核酸的溶解度随氯化钠浓度的变化而变化，即在

2、0.14M浓度时最低（如图所示）。在高盐状态使核酸溶解，再加蒸馏水以稀释氯化钠浓度，当接近0.14M时，核酸溶解度最低，凝集成絮状物析出。DNA分子中的脱氧戊糖基，在酸性溶液中变成ω-羟基–γ-酮基戊醛，与二苯胺试剂作用生成蓝色化合物（λmax＝595nm）。可用比色法测定。反应式如下。DNA（脱氧戊糖基）HO-CH2-C-CH2-CH2-CHO蓝色化合物O2　实验材料新鲜的鸡血、10%的柠檬酸钠溶液、95%酒精、2M氯化钠溶液、0.015M氯化钠溶液、玻棒、滤纸、滴管、漏斗、量筒（25ml、50ml）、烧杯（50

3、ml、100ml、500ml）、纱布、二苯胺溶液。3　实验准备3.1　取样及处理　取10%柠檬酸钠溶液100ml于500ml的烧杯中，取健康活鸡断颈取血，马上注入烧杯中，搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合，以免血液凝固。将此混合样品用4000r/min离心2min即可，去上清液，留血细胞备用。若无离心机，也可在实验前一天按照上述方法取得血液，置入冰箱内以防腐败，血液长时间静置后，血细胞会自行沉淀，待实验时，将上清液除去，即得血细胞。3.2　药品配制取11.7g氯化钠溶于100ml的蒸馏水，即为2M氯化钠溶液；取8.

4、7g氯化钠溶于1000ml的蒸馏水中，即为0.015M氯化钠溶液。取0.5g二苯胺溶于50ml冰醋酸中，再加1.25ml的浓硫酸，即得二苯胺试剂（使用前配制）时间就是金钱，效率就是生命！唯有努力方可成就，唯有惜时才能成功！4　实验步骤4.1　提取细胞核物质取制备好的离心沉淀物5～10ml，置入50ml烧杯中，加蒸馏水20ml，同时用玻棒充分搅拌，使血细胞加速破裂，核酸溶解到蒸馏水中，然后用2层纱布置于漏斗上过滤，取其滤液3～4ml。4.2　核酸的初步提取　将滤液全部倒入500ml的烧杯中再加入2M的氯化钠溶液40m

5、l，并摇动使混合均匀，此时，核酸处于高盐溶液中，呈溶解状态。沿烧杯壁缓缓加入80～100ml蒸馏水，同时用玻棒不停地搅拌，此时会有絮状物出现，继续搅拌加入蒸馏水，直到絮状物不再增加为止。4.3　核酸再溶解另取100ml烧杯，置入2M氯化钠溶液20ml，用玻棒将步骤2中产生的絮状物卷起，放入烧杯内2M的氯化钠溶液中，并加以搅拌，使絮状物及表面杂质溶解，这时溶液的浓稠性逐渐增高，继续加入絮状物，直到溶液不再溶解絮状物。4.4　提取核酸在步骤3的烧杯中加入95%的酒精50ml，并加以搅拌，就会出现清洁的丝状物，用干净的玻

6、棒将此丝状物卷起，用滤纸吸干附着在其上的水分。此丝状物的主要成分为鸡血细胞核酸。4.5　DNA的显色鉴定取2支试管，分别编为1号、2号，各加入0.015M的氯化钠溶液2ml，将所得丝状物放入1号试管，搅拌溶解然后向2支试管中各加入4ml二苯胺试剂，混合均匀后，在沸水浴中加热10min，使其冷却，观察颜色变化，溶液变蓝，并产生蓝色沉淀物。5　本实验需特别注意的几个问题本实验方案简单易行，仅需要一台式低速的离心机（800型），就能顺利达到实验目的。可以免去真空抽吸过滤等设备，但由于二苯胺溶液是用浓硫酸和醋酸配制而成的，

7、在配制和使用过程中会散发出有害的刺激性气体，如果操作不慎，会损伤操作者的上呼吸道粘膜和皮肤。因此必须注意：⑴配制二苯胺溶液，要在空气流动的地方进行。最好在室外，远离学生活动的场所，顺着风向配制。配制的顺序必须是浓硫酸加入醋酸二苯胺溶液中，不能相反。现配现用，不宜长期保存。配制好的二苯胺溶液要用小口磨口棕色瓶暂存，且应集中在老师处统一管理配发使用。⑵学生分组实验时，首先要加强安全教育，严格按照操作规程滴加二苯胺溶液。增强自我保护意识，防止硫酸灼伤皮肤和衣服。⑶在整个分组实验中，要加强通风排气，如有排风罩的学校，最好能

8、在排风罩集中进行滴加二苯胺和水浴等步骤。也可以将水浴锅与学生分开，在室外或通风的其它房间。如果必须在同一间教室里进行，则可以在顺风的窗口，附加电风扇加强通风排气，使有害气体可以尽快排除。⑷实验完毕，试管及废液等要集中由专人负责处理。时间就是金钱，效率就是生命！唯有努力方可成就，唯有惜时才能成功！据参与实验教学活动的学生反映，经过实验后他们对DNA的认识，再也