dna粗提与鉴定

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1、专题五课题1DNA的粗提取与鉴定【学习目标】1、通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质。2、理解DNA粗提取与鉴定的原理【基础知识】一.提取DNA的方法提取生物大分子的基本思路是对于DNA的粗提取而言，就是要利等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA,去除其他成分。一）DNA的溶解性：中溶解度不同，利用这DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的一特点，选择适当的盐浓度就能使充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。图5—1是DNA在NaCI溶液中的溶解度曲线，请根据曲线图，思考：①DNA在不同浓度NaCI溶液中溶

2、解度有何特点？②要使DNA溶解，需要使用什么浓度?③要使DNA析出，又需要使用什么浓度?④采用DNA不溶于酒精的原理，可以达到什么目的？DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解,但是对没有影响。大多数蛋白质不能忍受60-解三）DNA的鉴定:但对DNA没有影响条件下，DNA遇会被染成色，因此二苯胺可-80oC的高温，而DNA在以上才会变性。洗涤剂能够瓦以作为鉴定DNA的试剂。二.实验设计1）实验材料的选取：凡是含有_的生物材料都可以考虑，但是，选用生物组织，成功的可能性更大。⑤思考：哺乳动物的红细胞、肠杆菌的特点2）破碎细胞，获取含DNA的滤液

3、：动物细胞的破碎比较，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的，同时用搅拌，过滤后收集即可。如果实验材料是细胞，需要先用溶解细胞膜。例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的和,进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集c⑥思考:为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？①思考：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么?②思考：在处理植物组织时需要进行研磨，其目的是什么？如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？3)去除滤液中的杂质：方案一的原理是利用DNA在不同浓度的NaCI溶液中不同，方案二直接在滤液中加，原理是0方案三将滤液放在O原理是③思考：为什么反复地

4、溶解与析出DNA,能够去除杂质？4)DNA的析出与鉴定:将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积、冷却的,静置,溶液中会出现，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。⑨取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为的NaCI溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的。混合均匀后，将试管置于中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变-一.操作提示：1.以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g，防止O2.加入洗涤剂后，动

5、作要、,否则容易产生大量的泡沬，不利于后续步骤地操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要，以免,导致DNA分子不能形成絮状沉淀。3.二苯胺试剂要，否则会影响鉴定的效果。4.操作步骤备鸡血细胞液加，静置或离心1破碎细胞，释放DNA…加，同一方向快速通方向搅拌1过滤，除去、等。溶解核内DNA加入至，同一方向缓慢搅拌IDNA析出加蒸馏水至0.14mol/L,过滤，在溶解到2moI/L溶液中I除去细胞质中的大部分物质。DNA初步纯化与等体积95%冷却酒精混合，析出IP余去、、等。DNA鉴定二苯胺，沸水浴，呈现1.在研究DNA的基因样本前，采集来的血样需耍蛋白

6、水解酶处理，然后用冇机溶剂除去蛋白质。用蛋a水解酶处理血样的目的是（）A.除去血浆屮的蛋白质B.除去染色体上的蛋白质C.除去血细胞表面的蛋白质D.除去血细胞中的所宥的蛋白质，使DNA释放，便于进一步提纯1.与析出DNA粘稠物有关的叙述，不正确的是（）A.操作时缓缓滴加蒸馏水，降低DNA的溶解度B.在操作A吋，用玻璃棒轻缓搅拌，以保证DNA分子完整C.加蒸馏水吋同吋降低DNA和蛋白质的溶解度，两者均町析出D.当丝状粘稠物不再增加时，此时NaCl的浓度相当于0.14mol/L2.洗涤剂能够瓦解（），但对DNA没有影响。A.细胞壁B.细胞膜C.细胞核D.

7、细胞质3.在沸水浴的条件下，0>^遇（）会被染成蓝色。A.斐林试剂B.苏丹III染液C.双缩脲试剂D.二苯胺4.在DNA提取过程中，最好使用塑料试管和烧杯，目的是（）A.不易破碎B.减少提取过程中DNA的损失C.增加DNA的含量D.容易洗刷5.下列操作屮，对DNA的提取量影响最小的是（）A.使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出DNA等核物质B.搅拌时，要使用玻璃棒沿一个方向轻缓搅拌C.在“析出DNA粘稠物”时，耍缓缓加蒸馏水，直至溶液屮粘稠物不再增加D.在用酒精沉淀DNA时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放入冰箱巾冷却E在DNA的溶解和再溶解吋，要充分

8、搅拌6.DNA的粗提取中，将与滤液体积相等的、冷却的（），静置2—3min,溶液中会出现白色丝状物。A.0.9%的NaCl