高能x射线对肺腺癌a549细胞ercc1表达的影响的论文

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1、高能X射线对肺腺癌A549细胞ERCC1表达的影响的论文高能x射线对肺腺癌a549细胞ercc1表达的影响【关键词】肺肿瘤；a549细胞；切除修复交叉互补基因1；x线疗法【摘要】　　目的检测高能x射线对肺腺癌a549细胞与顺铂耐药相关的基因——切除修复交叉互补基因1（ercc1）表达的影响。方法对a549细胞进行x射线照射，总剂量10gy／(5d·5f)。利用rtpcr检测照射前及照射开始后第1～4周细胞的ercc1基因的表达；免疫组织化学sabc法检测照射前后细胞ercc1蛋白的表达。结果照射后第1～3周a549细胞ercc1mrna及蛋白的表达水平比照射前显著升高

2、，差异有显著性(f=152.00、26.63,q=6.03～28.31,p<0.01)。结论肺腺癌a549细胞照射后可能出现顺铂耐药。【关键词】肺肿瘤；a549细胞；切除修复交叉互补基因1；x线疗法　　effectofhighenergyxrayonercc1expressioninlungadenocarcinomaa549cells　　ei,etal　　　　(departmentofoncology,theaffiliatedhospitalofqingdaouniversitymedicalcollege,qingdao266003,china);　　［

3、abstract］objectivetostudythehighenergyxrayonexpressionofercc1geneassociatedanlungadenocarcinomaa549cell.methodsthea459cellsmunohistochemistry(sabcmethod).resultsonthefirsttothirdrnaandproteinayshoor;a549cell;excisionrepaircrossplementationgroup1;xraytherapy　　肺癌是世界范围内最为常见的恶性肿瘤之一，其中非小细

4、胞肺癌（nsclc）约占80％，而约2/3的nsclc病人在发现时已失去手术机会，故放化疗综合治疗已成为该类肿瘤常用的治疗手段。.再次或多次化疗可以诱导多药耐药导致肿瘤的化疗敏感性降低已无异议，但目前关于放疗后耐药基因及其蛋白表达情况以及相应的放疗对化疗敏感性的影响方面的研究较少,结果也不一致。因此，有针对性地对其研究十分必要。目前含铂方案是nsclc一线标准化疗方案。研究结果证实，ercc1可作为铂类药物化疗效果的独立预测指标[15]。本实验针对体外培养的肺腺癌a549细胞株,检测高能x射线照射前后与顺铂耐药相关的基因——切除修复交叉互补基因1（ercc1）及其编码

5、产物的表达随时间变化情况，探讨照射与肺腺癌a549细胞顺铂耐药性的关系。现将结果报告如下。　　1材料与方法　　1.1细胞培养　　人肺腺癌细胞株a549由中国科学院上海生物学研究所提供。培养于含有体积分数0.10的小牛血清、10×104u/l的青霉素及10×104g/l链霉素的rpmi1640培养液中，置于37℃、体积分数0.05co2及饱和湿度的培养箱中传代培养。待细胞生长至指数生长期时进行x射线照射。　　1.2照射方法　　照射源为直线加速器(varian23ex，美国)，采用6mv的x射线，源皮距为100cm。细胞每次照射剂量为2gy，每天1次，总剂量10gy。剂量率

6、为300cgy/min。射野大小为15cm×15cm。把培养瓶置于照射野中心，每次照射后放回培养箱继续培养，全部照射结束后，每隔1周取对数生长期的细胞冻存，用于rtpcr和sabc法检测，每组实验重复3次。　　1.3rtpcr检测ercc1mrna的表达　　按trizol试剂盒(购自美国invitrogen公司)说明书及rtpcr试剂盒（购于大连宝生物工程有限公司）说明书的方法提取总细胞rna，反转录合成cdna。ercc1引物序列为：正向引物5′acccctcgacgaggatga3′,反向引物5′gatggcatattcggcgtaggt3′，扩增

7、片断长度为127bp。内参照βactin扩增片段长约为621bp，引物序列为：前向引物5′acactgtgcccatctacgagg3′，反向引物5′agggccggactcgtcatact3′。上述ercc1及内参照βactin引物均由上海生工生物工程有限公司合成。逆转录总反应体系为20μl，反应条件为：37℃5min后，42℃1h，72℃10min。pcr反应体系为50μl，反应条件为：94℃预变性5min;然后94℃变性30s，60℃退火30s，72℃复性65s，共35个循环;最后72℃充分延伸10min后终止反应。取