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1、纤维素酶法提取黄芪总黄酮的工艺研究的论文作者：贲永光，丘泰球，李坤平，孙爱群【摘要】 目的优选黄芪总黄酮的提取工艺。方法用正交设计法探讨了影响纤维素酶法提取黄芪中总黄酮的主要因素,并确定了最佳提取工艺。结果纤维素酶法提取黄芪总黄酮的最佳工艺条件为:酶解时间为120min，酶解温度为30℃，酶量为8mg，ph值为4.5。结论此工艺简单可行,是一条提取黄芪总黄酮类物质的有效途径。【关键词】纤维素酶黄芪总黄酮正交设计法 abstract：objectivetoopmtimizetheextractiontechnicsfortotalflavonoidsfromastrag
2、alus.methodstheorthogonaldesignaincelluloseenzymaticextractionoftotalflavonoidsfromastragalusandthebestextractiontechnicsined.resultstheoptimumconditionscelluloseenzymaticextractionoftotalflavonoidsfromastragalusolysistime120min,hydrolysistemperature30℃,enzymevolume8mg,phvalue4.5.conclusion
3、thismethodissimpleandfeasible.itisaneffectiveastragalis. keyembranaceus的干燥根,具有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌等功效。.黄芪中的主要有效成分为多糖、皂苷和黄酮类化合物,其中黄酮类化合物主要包括毛蕊异黄酮(calycosin)及其糖苷芒柄花素(formonoin)和芒柄花苷(ononion)等［1］。研究证实黄芪中的黄酮类成分具有多种药理活性,具有清除氧自由基、抑制脂质过氧化、增强免疫力、抗病毒以及促进细胞增殖的作用［2～3］。 近年来，酶技术应用于中草药有效成分的分离提取取得了不少新的成果，尤
4、其应用纤维素酶可破坏细胞壁的致密结构，加速药用有效成分的溶出，提高药用有效成分的提取率。酶解过程的实质是通过酶解反应促进传质过程。纤维素酶是一组能够降解纤维素生成葡萄糖的酶的总称。纤维素是黄芪细胞壁的主要成分，亦是胞内黄酮等大分子溶出的主要屏障，利用纤维素酶水解细胞壁，利于胞内成分溶出［4～9］。但将纤维素酶应用于提取黄芪中总黄酮的研究鲜见报道。本实验将上海伯奥生物科技有限公司提供的绿色木酶（主要成分为纤维素酶，以下简称纤维素酶）用于黄芪总黄酮的提取，应用正交设计优化酶法提取黄芪总黄酮的工艺条件，探讨各因素对黄芪总黄酮提取率的影响，以期达到提高提取率、缩短提取时间、减少能耗和
5、有效保存黄芪总黄酮的生物活性，并为植物酶技术在中药有效成分的提取方面的应用提供依据。 1仪器与试剂 1.1仪器 hh-6恒温水浴锅（江苏金坛市宏华仪器厂）；re-52cs旋转蒸发器(巩义市英峪予华仪器厂)；予华牌循环水真空泵(河南省巩义市英峪予华仪器厂)；uv1101紫外/可见分光光度仪(上海天美科学仪器有限公司)；ay120电子分析天平（日本岛津公司）；kh-400kdb型高功率数控超声清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）；摇摆式高速中药粉碎机(大德中药机械有限公司)。 1.2试剂 乙醇（无水乙醇）；5%亚硝酸钠；10%硝酸铝；4%氢氧化钠；乙酸（冰醋酸）；无水乙酸
6、钠；芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号:050923）,黄芪购自广州致信中药饮片有限公司，纤维素酶(活性单位≥15u／mg)由上海伯奥生物科技有限公司提供。 2方法与结果 2.1黄芪总黄酮成分提取 称取纤维素酶8mg，用ph=4.5的hac-naac缓冲液10ml混合后与1g黄芪粉末（过50目筛）混合均匀，在30℃下处理1h后加95％的乙醇20ml，在70℃下浸提1h过滤，用20ml体积分数85％的乙醇洗涤残渣过滤，合并滤液，回收乙醇，残渣溶于质量分数为85%的乙醇，定容至25ml，精密吸取1ml于25ml的容量瓶中，30%乙醇定容,得供试品溶液。 2.2黄芪总
7、黄酮含量的测定 2.2.1芦丁对照品溶液的制备 准确称取于芦丁对照品10mg,置于50ml容量瓶中,加30%的乙醇30ml,超声使之溶解,冷却至室温,并稀释至刻度,摇匀,得浓度为200μg/ml的芦丁对照品溶液,冷藏,备用。 2.2.2吸收波长的选择 对照品测定波长的确定：取对照品溶液1ml，按标准曲线项下的方法进行，在400～700nm波长范围内扫描，结果在500nm波长处为最大吸收。样品测定波长的确定：取样品的乙醇提取液1ml，按标准曲线项下的方法进行，在400～700nm波长范围内扫描，结
