纤维素酶辅助法提取核桃叶总黄酮的工艺研究开题报告

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1、附件4《楚雄师范学院本科毕业论文（设计）开题报告》楚雄师范学院本科毕业论文（设计）开题报告书题目纤维素酶辅助法提取核桃叶总黄酮的工艺研究姓名熊顺琼学号20111053118系（院）化学与生命科学学院专业科学教育（师范类）指导教师宋建梅2015年3月23日论文（设计）题目纤维素酶辅助法提取核桃叶总黄酮的工艺研究选题的动因与根据（说明选择本课题的理论价值、实践意义；综述国内外有关本课题的研究动态及见解）在云南大理州巍山县紫金乡一带核桃资源丰富，人们除利用果实、木材外，对核桃叶及外果皮很少利用。核桃叶含VB、VC、VD、VE

2、、胡萝卜素等丰富的营养物质与核桃醌、核桃甙、鞣质及黄酮类等生物活性物质，其中黄酮类化合物含量可达7．26％。核桃叶能防治维生素缺乏症、淋巴结、甲状腺肿大、黄疸病、结核病等，也能解毒、消肿等[1]。黄酮类化合物是广泛地存在于植物中的一类化合物，具有抗癌、抗衰老、抗炎、降血糖、降血压、调节内分泌等多种功能，还具有强有力的自由基清除性和较强的天然抗氧化性，在医药、化妆品、食品等领域有着广泛的应用。从植物中提取黄酮类化合物的方法有溶剂法[1]（热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法）、微波辅助提取法[3]、超声波振

3、荡提取法[6]、酶辅助提取法[4]、双水相提取法[1]、半仿生提取法、膜分离法、热压流体萃取法、高压液相提取法[1]。目前人们对核桃叶中黄酮的提取研究用的方法是以槲皮苷为对照品，采用氯化铝显色紫外分光光度法，结合单因素试验和正交试验对该体系进行系统优化研究，或者以70%乙醇回流法，测定山核桃叶中总黄酮的含量[10]。据所查文献尚未有用纤维素酶辅助法提取核桃叶总黄酮的工艺研究的相关报道，纤维素酶能破坏核桃叶细胞壁纤维素的苷键，降解纤维素，使细胞壁疏松、破裂，减少提取过程中的传质阻力，因此，本课题将尝试用用纤维素酶酶解预处

4、理与乙醇浸提法相结合从核桃叶中提取总黄酮，通过单因素试验考察酶用量、酶解时间、酶解温度、pH对总黄酮提取率的影响，优化提取工艺条件，以期为核桃叶中黄酮类化合物的高效利用提供参考。课题的主要内容：1、原料处理2、核桃叶中总黄酮的提取3、定性检验4、核桃叶提取液中总黄酮含量的测定（1）标准曲线的绘制（2）总黄酮含量的测定5、单因素试验（1）酶用量（2）酶解时间（3）酶解温度（4）pH6、正交试验7、结果与分析8、小结与讨论研究方法：1、原料处理流程摘取新鲜的核桃叶→洗净→晒干→粉碎→备用2、提取工艺流程干燥的核桃叶粉末→添

5、加适量纤维素酶→加入少量的乙醇水溶液和pH缓冲溶液酶解→乙醇水溶液浸提→恒温水浴→抽滤得滤液→测定滤液中总黄酮的含量3、定性检验通过与盐酸一镁粉反应，黄酮化合物溶液颜色逐渐变为紫红色，另外在提取物中加入FeCl3，NaOH，溶液分别变为蓝色、棕黄色[8]，加入AlCl3溶液变为黄绿色，由此可判断被测物可能是黄酮类化合物。4、提取液中总黄酮含量的测定[8]①标准曲线的绘制。以芦丁为对照品，利用紫外可见分光光度计在510nm波长处测定不同浓度芦丁标准溶液的吸光度，绘制标准曲线。②总黄酮浓度的测定。吸取10ml核桃叶总黄酮提

6、取液于50mL容量瓶中，加入10mL30%的乙醇（体积分数，下同）及2mL50g/L的亚硝酸钠，摇匀后放置6min；加入2mL100g/mL的氯化铝，摇匀后放置6min；再加入20mL40g/L的氢氧化钠，混匀，用30%的乙醇定容至刻度，15min后测定A510nm，依据芦丁标准曲线回归方程计算提取液中总黄酮的浓度，计算核桃叶粉末中总黄酮类化合物的提取率。 总黄酮提取率=（提取液体积×提取液中总黄酮化合物浓度）/核桃叶粉末质量×100% 5、单因素试验根据70%的乙醇浓度，1.5小时的酶解时间，1：15的料液比，50摄

7、氏度的酶解温度为参考。设置单因素试验分别考察酶用量、酶解时间、酶解温度、pＨ、乙醇体积分数和乙醇用量对总黄酮提取率的影响[8]。1、结果与分析（1）酶用量对总黄酮提取率的影响（2）酶解时间对总黄酮提取率的影响（3）酶解温度对总黄酮提取率的影响（4）酶解PH对总黄酮提取率的影响（5）正交试验5、小结与讨论完成期限和采取的主要措施：完成期限：2015年3月1日至2015年5月31日主要措施：1.查阅相关资料进行初步选题2015年3月1日至2015年3月17日2.确定题目2015年3月17日至2015年3月19日3.撰写开题

8、报告2015年3月23日至2015年3月30日4.进行开题答辩2015年3月31日5.进行实验，选择适宜提取条件2015年4月1日至2015年5月13日6.根据实验结果撰写毕业论文2015年5月14日至2015年5月18日8.修改论文2015年5月19日至2015年5月23日9.完成论文2015年5月24日主要参考资料：[1]董宇