手霉素对白血病干细胞和骨髓干细胞的细胞毒作用

《手霉素对白血病干细胞和骨髓干细胞的细胞毒作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、手霉素对白血病干细胞和骨髓干细胞的细胞毒作用【关键词】法尼基转移酶抑制剂;手霉素;白血病干细胞;细胞增生;细胞凋亡　　【Abstract】ObjectiveToprobeintothecytotoxiceffectofmanumycinonleukemicstemcell(LSC).MethodsMTTmethodanumycinonLSCproliferation.AnnexinⅤFITCmethodineLSCapoptosistoanalyzecellcyclebyfloetry.Results

2、phaseycincouldpromoteapoptosisandinhibitLSCprolierationbyarrestingLSCinG2/Mphase，buthasnocytotoxiceffectonnormalhemopoieticstemcell(HSC).　　【Keyycin;Leukemicstemcell(LSC);Cellularproliferation;Apoptosis　　原癌基因Ras家族编码是与细胞增殖和生长有关的一些重要细胞信号途径的上游产物，Ras基因突变导致Ras

3、激活并具有致癌性，翻译后的Ras蛋白的关键环节是经法尼基转移酶的法尼基化〔1〕。此酶的抑制剂首先被用于抑制Ras突变肿瘤的治疗。手霉素作为法尼基焦膦酸脂(FPP)的模拟物，具有竞争性结合法尼基转移酶的作用，具有一定的抗肿瘤作用〔2〕。本研究拟观察手霉素对白血病干细胞(LSC)的细胞毒作用。　　1资料与方法　　1.1一般资料、药品与主要试剂选择本院血液肿瘤科初诊、复发或难治急性髓系白血病(AML)患者10例，其中男6例，女4例;年龄21～58(中位数39)岁。手霉素、MTT、碘化丙啶(PI)、Annexi

4、nⅤFITC凋亡试剂盒均购自Sigma公司。10%胎牛血清购于美国Gibco公司。　　1.2LSC的分离及培养所有患者签署知情同意书后，无菌抽取骨髓2～3ml，常规方法分离单个核细胞，然后利用免疫磁珠法分离LSC细胞(CD34+CD38)。在37℃，5%CO2，饱和湿度的条件下，于含10%胎牛血清、100U/ml青霉素、100U/ml链霉素的RPMI1640培养液中培养，2～3d换液传代1次，实验用细胞处于对数生长期。　　1.3MTT法检测细胞增生抑制率取对数生长期LSC和造血干细胞(HSC)，制

5、成2×105/ml，悬浮于含2%胎牛血清的RPMI1640培养液，接种于96孔培养板，每孔200μl。LSC和HSC各孔分别加入不同浓度手霉素(0，0.5，1，2，4，8μmol/L)，对照组加入等体积溶剂二甲基亚砜(DMSO)，继续培养，分别于0，12，24，48，72h检测。每组设置3个复孔。实验结束前4h每孔加入5mg/ml的MTT20μl，温箱中继续孵育4h后离心，去上清，每孔加入DMSO150μl，振荡后用酶标仪进行检测，根据570nm波长的吸光度(A值)，计算细胞增生抑制率。细胞增生抑制率

6、(%)=(1实验组A值/对照组A值)×100%。　　1.4AnnexinⅤFITC试剂盒检测细胞凋亡取1×106待测细胞用PBS液洗涤2次，用1倍Buffer重悬细胞，再将5μl的AnnexinⅤFITC和10μl的碘化丙啶(PI)加入细胞悬液中。室温避光10min后，用流式细胞仪检测细胞凋亡率。　　1.5流式细胞术分析细胞周期取1×106待测细胞用PBS液洗涤2次，用70%冷乙醇固定，4℃冰箱过夜。用PBS洗涤过后，加入1mg/mlRNA酶(美国Sigma公司)，37℃孵育10min，再加含Tr

7、itonX100(美国SantaCruz公司)的PI(50μg/ml)染色液400μl，4℃避光30min后，用流式细胞仪分析细胞周期。　　1.6统计学处理数据以x±s表示，使用SPSS13.0软件进行方差分析。　　2结果　　2.1手霉素对LSC和HSC的细胞增生的影响随手霉素浓度的增加，其对LSC的增生抑制作用逐渐增大，0，0.5，1.0，2.0，4.0，8.0μmol/L手霉素对LSC的增生抑制率分别是0，(10.21±2.48)%，(26.73±2.14)%，(55.94±3.18)%，(60.

8、82±4.98)%，(75.23±3.69)%，各浓度间细胞增生抑制率均有显著差异(P<0.05)。且随手霉素作用时间的延长，其对LSC的增生抑制作用也逐渐增大，表现为时间剂量依赖关系，2.0μmol/L手霉素分别作用0，12，24，48，72h后，LSC的增生抑制率分别是0，(23.41±4.17)%，(50.14±3.98)%，(62.37±3.59)%，(70.33±4.42)%。各时间点之间细胞增生抑制率均有显著差异(P<