葡萄胎组织mmps与timps表达及意义

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1、葡萄胎组织MMPs与TIMPs表达及意义【关键词】基质金属蛋白酶类基质金属蛋白酶组织物抑制物葡萄胎［ABSTRACT］ObjectiveToexploretheexpressionsofMMPsandTIMPsinhydatidiformmoleandtheirclinicalsignificance.MethodsThemRNAexpressionsofMMPsandTIMPsmole(n=35)includingsixmalignanttransformedmoleandnormalvilli(n=18).ResultsTheratiosofMMP9/TIMP1mRNAe

2、xpressionsalignanttransformedmolethanthoseinthenonmalignantoneandnormalvilli（F=3.62,q=3.82,3.57,P<0.05）.ThedifferencesinexpressionsofMMPsandTIMPsRNAexpressionplaysaroleinpredictingmalignancyofhydatidiformmole.［KEYMPs）几乎可降解细胞外基质（ECM）中除多糖以外的所有成分,是调节ECM动态平衡的最重要的一大酶系。基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMPs)能与相应的MM

3、Ps酶原及其活化形式结合,从而抑制MMPs的活性及产生,阻止肿瘤发生恶变和转移，因此，TIMPs的调节失衡在肿瘤的侵袭及转移中可能起重要作用。本研究通过检测基质金属蛋白酶及其抑制物MMP7、MMP9、TIMP1及TIMP2mRNA在正常绒毛和葡萄胎组织中的表达水平，探讨它们与葡萄胎恶变间的关系，为临床治疗提供依据。1资料与方法1.1一般资料35例葡萄胎病例均为2001年1月～2003年1月在青岛大学医学院附属医院住院病人，经病理检查诊断为葡萄胎，清宫前均未进行预防性化疗；病人年龄22～36岁，中位年龄28岁；平均孕周为12周；随访期间有6例恶变为侵蚀性葡萄胎，其诊断参照宋

4、鸿钊[1]提出的侵蚀性葡萄胎的诊断标准，列为葡萄胎恶变组（A组），其余病人作为萄胎未恶变葡组（B组）。18例行人工流产健康妇女作为对照组，随访后未发生滋养细胞疾病或持续性血HCG升高；病人年龄23～36岁，中位年龄28岁；平均孕周为12周。1.2方法1.2.1新鲜标本的收集与处理所有标本均在清宫时收集，取宫腔小水泡组织约0.5g，置于1.5mLDEPC处理EP管中，立即置-79℃冰箱中备用。1.2.2RTPCR方法所有引物均由上海生工生物有限公司合成，以GAPDH为内参照。组织样本匀浆破碎后，按照Trizol（Invitrogen公司）说明提取总RNA，用紫外分光光度计测定RN

5、A样品于波长260和280nm处的吸光度，以观察所提取RNA样品的纯度，并计算其含量；取1g总RNA按照PromegaA3500逆转录试剂盒说明合成cDNA；取3μL逆转录产物，2.5μLbuffer,1.5μLMgCl2,0.5μLdNTP,上下游引物各1.25μL，Taq酶0.2μL，最后加入去离子水至25μL。开始94℃变性5min，然后94℃预变性30s；MMP9、MMP7、TIMP1及TIMP2分别行54、57、53、57℃退火30s，72℃延伸1min，共30个循环；最后72℃延伸10min，4℃保存；取5μLPCR产物，1μL上样缓冲液于20g/L的琼脂糖凝

6、胶中电泳60min，在紫外线下凝胶成像。1.2.3表达结果判断标准PCR产物半定量分析,用天能GIS凝胶图像分析系统扫描凝胶，进行吸光度扫描和测定灰度值。以GAPDH作为内参照校正,用目的基因与GAPDH灰度比值作为目的基因的相对表达含量。2结果2.1MMPs与TIMPsmRNA在各组织中的表达2.1.1RNA样品鉴定所提标本的RNA浓度在0.5～5.0g/L之间，A260/A280在1.8～2.0之间，20g/L的琼脂糖凝胶电泳RNA可见3条清晰的条带（图1～4）。2.1.2MMPs与TIMPsmRNA在各组织中的相对表达各组MMP9、MMP7、TIMP1、TIMP2的

7、mRNA表达水平差异无显著意义（P>0.05）。MMP9/TIMP1比值在各组中的表达差异有显著性（F=3.62，P<0.05）；A组中MMP9/TIMP1比值分别高于B组和对照组，差异有显著意义（q=3.82、3.57,P<0.05）。表1各组组织中MMPs与TIMPsmRNA的相对表达水平2.2各指标间的相关性分析经Pearson相关性分析显示，在所有组织中MMP9与MMP7表达呈正相关(r=0.985,P<0.01)，MMP9与TIMP