清热复方对热休克大鼠肝、肺组织热休克蛋白基因表达的调控作用

《清热复方对热休克大鼠肝、肺组织热休克蛋白基因表达的调控作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、清热复方对热休克大鼠肝、肺组织热休克蛋白基因表达的调控作用：王洪琦，邹素芬，李建国【关键词】热证／中药疗法　　摘要：【目的】探讨清热复方对大鼠热休克蛋白70(HSP70)表达的调控作用。【方法】将70只大鼠随机分为热休克模型组、热休克加白虎汤组、热休克加黄连解毒汤组、内毒素模型组、内毒素加白虎汤组、内毒素加黄连解毒汤组和正常对照组7组，每组10只。采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)对热休克模型组、内毒素模型组和正常对照组大鼠的肝、肺组织进行了HSP70mRNA表达的检测，观察清热复方白虎汤和黄连解毒汤分别对两种模型大鼠肝、肺组织

2、HSP70mRNA表达的影响。【结果】热休克模型组、热休克加白虎汤组和热休克加黄连解毒汤组中HSP70mRNA的表达高于正常对照组（Ｐ＜００５）；热休克加白虎汤组和热休克加黄连解毒汤组均高于热休克模型组（Ｐ＜００５）；内毒素模型组、内毒素加白虎汤组和内毒素加黄连解毒汤组之间的HSP70mRNA表达以及与正常对照组相比均无显著性差异（Ｐ＞００５）。【结论】提示不同因素导致的热证状态下HSP70的基因表达不一致，清热复方可诱导热休克大鼠肝、肺组织中HSP70表达的增加，从而提高细胞的耐受力，避免细胞组织的损伤。　　关键词：热证／中药疗

3、法；白虎汤／药理学；黄连解毒汤／药理学；热休克蛋白70；疾病模型，动物　　生物体在高温或其他因素刺激下会诱导基因开放而合成一组新的蛋白质―热休克蛋白(heatshockproteins,HSPs)。许多研究证实整体动物的热处理可预防随后的心、脑、肺、视网膜等损伤，并认为全身热处理对这些器官的保护作用与HSPs的表达有关［１］。HSPs作为分子伴侣，在维持细胞的正常形态及功能中起着重要作用，参与其他蛋白质的折叠、转运、合成等过程，与细胞内的其他肽类蛋白质结合，参与细胞的抗损伤、修复和热耐受过程，其在多种疾病过程中的重要作用已经被大量

4、证据证实。本研究主要采用逆转录聚合酶链反应(ＲＴＰＣＲ）观察白虎汤和黄连解毒汤对热休克、内毒素两种大鼠热证模型的HSP70基因表达的调控，以探讨清热解毒中药对HSP70表达的影响。　　1材料与方法　　11研究对象　　清洁级健康雄性SD大鼠70只，体重(200±10)g，由中山医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：2696001。　　12药物与试剂　　药物：白虎汤(石膏30g、粳米9g、知母9g、甘草3g)，每剂水煎浓缩至50mL，相当于生药1g/mL；黄连解毒汤(黄连9g、黄芩6g、黄柏6g、栀子9g)，每剂水煎浓缩至30mL，

5、相当于生药1g/mL，4℃保存备用。　　主要试剂：总RNA提取试剂盒和逆转录PCR反应试剂盒(大连宝生物工程有限公司提供)；RTＰＣＲ引物(Canada,StressGenCorp,STM507);βaction引物(上海生工生物工程公司提供)；DL2000DNAMarker(大连宝生物工程有限公司提供)。　　13主要仪器　　ＴＧＬ16G型台式高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)；DNA／RNA纯度检测仪(GeneQuantAmericanPharmaciaBiotechCorp)；PE9600型PCR扩增仪(AmericanPe

6、rkinCorp)；EDAS120电泳凝胶图象分析系统(AmericanKodakCorp)。　　14　动物分组及处理　　70只雄性SD大鼠随机分为热休克模型组、热休克加白虎汤组、热休克加黄连解毒汤组、内毒素模型组、内毒素加白虎汤组、内毒素加黄连解毒汤组、正常对照组7组，每组10只。　　141热休克组大鼠模型的制备与处理　　将大鼠按不同组别分别用生理盐水、白虎汤、黄连解毒汤灌胃(100g/kg)，1h后进行第2次灌胃，再经1h将大鼠置恒温烤箱中进行热休克处理，参考Cruiie方法［2］，温度控制在约55℃，测量大鼠肛温达到42℃，

7、维持10～15min，密切观察大鼠动态，大鼠出现烦躁、乱窜动、毛发竖立、爪底湿润后，断头处死，取肺、肝组织备用。　　142内毒素组大鼠模型的制备与处理　　将大鼠按不同组别分别用生理盐水、白虎汤、黄连解毒汤灌胃(100g/kg),1h后于尾静脉注射内毒素(15mg/kg)，1h后再重复灌胃，3h后观察大鼠出现烦躁、乱窜动后，断头处死，取肺、肝组织备用。　　143正常对照组　　生理盐水灌胃，不经其他任何处理，断头处死，取其肝、肺组织备用。　　15实验方法　　采用ＲＴＰＣＲ法检测各组大鼠肝、肺组织中HSP70mRNA的表达。βactio

8、n引物序列：SensePrimer5′ACCACAGTCCATGCCATCAC3′；AntisensePrimer5′TCCACCACCCTGTTGCTGTA3′。HSP70引物序列：SensePrimer5′CTCCAGCATCCGACAAGAA