塞来昔布联合卡培他滨对裸鼠人肝癌模型中肿瘤细胞增殖与凋亡的影响

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1、塞来昔布联合卡培他滨对裸鼠人肝癌模型中肿瘤细胞增殖与凋亡的影响：黄新余，王洪成，潘烨，戚大川，艾开兴，郑起【摘要】目的研究环氧化酶-2抑制剂塞来昔布(Celecoxib)和化疗药物卡培他滨(Capecitabine)对裸鼠人肝癌模型中肿瘤细胞增殖与凋亡的影响。方法建立LIC-D35裸鼠人肝癌模型，成瘤后40只裸鼠随机分成4组即对照组、塞来昔布组、卡培他滨组、联合用药组(卡培他滨与塞来昔布)。观察肿瘤大小，计算抑瘤率;采用RT-PCR方法观察肿瘤中COX-2的mRNA表达，并应用免疫组化法Ki-67检测肿瘤细胞增殖水平、末端脱氧核苷转移酶标记法(TUNEL)检测凋亡细胞。结果对照

2、组、塞来昔布组、卡培他滨组、联合组瘤体体积分别为(3880±438)mm3、(3374±465)mm3、(1859±362)mm3和(981±197)mm3;塞来昔布组、卡培他滨组、联合用药组抑瘤率分别为15%、45%和71%。四组中Ki-67阳性率分别为46%、32%、25%和11%;肿瘤细胞凋亡指数DI分别为8%、22%、27%和38%;塞来昔布组、联合组肿瘤组织中COX-2mRNA表达显著低于对照组和卡培他滨组(P<0.01)。结论塞来昔布可显著抑制裸鼠人肝癌模型中肿瘤细胞COX-2mRNA表达，抑制肿瘤细胞Ki-67表达，诱导肿瘤细胞凋亡。与卡培他滨联合应用可提高

3、抗肿瘤效果。【关键词】环氧化酶-2抑制剂;裸鼠;肝肿瘤　　[Abstract]ObjectiveToevaluatetheeffectofcelecoxibbinedainnudemice.MethodsLIC-D35livertumorsplantedin40nudemiceanddividedrandomlyinto4groups:thecontrolgroup(A)，thecelecoxibgroup(B)，thecapecitabinegroup(C)andthecelecoxibbinedorvolumem3，(3374±465)mm3，(1859±362)mm3，(

4、981±197)mm3inthecontrol，celecoxib，capecitabineandbinedgroup，respectively.Therateoftumorinhibitionmunohistochemicalassaysfortumorproliferation(Ki-67)shoorcellproliferationKi-67positiverateRNAbyRT-PCRmethodincelecoxibgroupandbinedgroupshoRNAoftumorsorthotopicimplantedinnudemice，itreduceprolife

5、rationandinduceapoptosisoftumorcell;Bybineproveitsanti-tumoractivities.　　[Keyice;hepatocellularcarcinoma　　研究表明，环氧化酶-2抑制剂可抑制肿瘤增殖，诱导肿瘤细胞凋亡[1]。近来研究发现环氧化酶抑制剂可增强肿瘤放射和化疗敏感性[2，3]。但也有不同报道。文献中环氧化酶-2抑制剂在肝癌中的研究报道很少，其抗癌作用机制尚不清楚。本实验采用人肝癌裸鼠模型(LIC-D35)，对塞来昔布联合卡培他滨在人肝癌裸鼠模型中肿瘤抑制作用进行研究，并探讨其作用机制。　　1材料与方法　　1.1构

6、建人肝癌裸鼠模型BALB/c裸小鼠(中科院上海实验动物中心提供)，40只均为雄性，SPF级，4～6周龄，体质量约18～20g。取人肝癌裸鼠转移模型LIC-D35瘤源(复旦大学肝癌研究所瘤源)按照规范原位接种于裸鼠肝左叶内。成瘤率达100%。随机分成4组：对照组(生理盐水)、塞来昔布组、卡培他滨组、联合组，每组各10只。　　1.2相关药物及试剂塞来昔布购自美国辉瑞公司，卡培他滨为瑞士罗氏公司产品，Ki-67试剂盒、TUNEL试剂盒均为DAKO公司产品。Tripure总RNA提取试剂盒、M-MLV逆转录酶、Taq酶、RNA酶抑制剂(均购自美国Promega公司);COX-2引物(上

7、海生物工程公司合成)，上游引物:5′-CAGCACTTCACGCATCAGTT-3′，下游引物:5′-TCTGGTCAATGGAAGCCTGT-3′，产物片段长342bp。　　1.3实验方法肿瘤种植术后5天开始治疗。对照组蒸馏水灌胃，每只0.3ml/d，连续3周;塞来昔布组用Celecoxib灌胃，每只25mg/(kg·d)，连续3周;卡培他滨组用Capecitabine1.8mmol/(kg·d)，连续3周灌胃、联合组Celecoxib和Capecitabine，用药剂量及给药途径与单独用