毛泡桐叶中乌索酸的提取分离及反相高效液相色谱分析

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1、毛泡桐叶中乌索酸的提取分离及反相高效液相色谱分析：易艳萍，邹盛勤，谢晚彬，陈武【摘要】　　目的提取鉴定毛泡桐叶中的乌索酸，并建立其含量测定方法。方法采用“醇提凝析法”新工艺分离制备乌索酸，IR，MS，NMR鉴定其结构。建立反相高效液相色谱测定其含量的方法，色谱柱为KromasilC18柱，流动相为乙腈-甲醇-水-磷酸（体积比168∶682∶150∶1.68），流速0.8ml/min，检测波长210nm，柱温25℃。结果乌索酸在0.92～16.56μg范围内线性关系良好（r=0.9996）。样品乌索酸含量为99.61%，得率为30.5%。结论“醇提凝析法”分离制备乌索酸工艺先进，实用可行，

2、为工业试验生产乌索酸提供了技术条件；RP-HPLC法测定乌索酸含量准确、精密度高、重复性好、线性范围宽，可作为控制乌索酸质量的方法。【关键词】毛泡桐叶乌索酸结构表征反相高效液相色谱　　Abstract：Objective：ToextractandidentifyursolicacidfromPauloentosa(Thunb.)Steudleavesandtoestablishadeterminationmethodofursolicacid.Methods：UrsolicacidPauloentosa(Thunb.)Steudleavesbyadoptinganeethodofetha

3、nolextractionandagglutinationseparation,anditsstructureinationmethodofursolicacidinPauloentosa(Thunb.)Steudleavesbyreversed-phasehighperformanceliquidchromtographatographiccolumn(KromasilC18,4.6mm×250mm,5μm),acetonitrile-methanol-obilephase(168:682:150:1.68,V/V)l/minflo)andthecolumntemperature(25

4、℃)ethodofethanolextractionandagglutinationseparationtoextractursolicacidisadvanced,rational,practicalandfeasible,anditprovidestechnologyconditionforindustrialproductionofursolicacid.RP-HPLCissimpleandaccurate,ithasgoodrepeatabilityandentosa(Thunb.)Steudleaf;Ursolicacid;Structuralcharacteristics;R

5、P-HPLC　　毛泡桐叶为玄参科泡桐属植物毛泡桐Pauloentosa(Thunb.)Steud的叶子［1］。泡桐的药用价值我国古代就有记载，《本草纲目》（1578年）记有“桐叶主恶蚀疮著阴皮主五痔、杀三虫，花主傅猪疮，消肿、生发。”泡桐的花、叶、果、木、皮、根均可入药［2］。泡桐叶含桃叶珊瑚苷、泡桐苷、毛蕊花苷、异毛蕊花苷、糖苷、多酚类［2］及熊果酸、乙酰熊果酸α,β［3］等，其中三萜酸类，特别是乌索酸和齐墩果酸，具有抗菌、抗肝炎、抗肿瘤、降血糖血脂、增强免疫功能等多种药理作用，已引起人们广泛的关注［5，6］。为此，我们以毛泡桐叶为原料，采用“醇提凝析法”提取分离乌索酸［5，6］，并建

6、立RP-HPLC测定分析乌索酸含量的方法，为开发利用丰富的毛泡桐药用植物资源提供科学依据。　　1器材与方法　　1.1材料　　毛泡桐叶采自江西宜春市宜春学院北校区，经江西省天然药物活性成分研究重点实验室鉴定为紫花毛泡桐P.tomentosa(Thunb)Steud的叶子。95%乙醇（食用级，南昌利康药械实业有限公司）；“YCXY-1号”除杂剂（自制）；复合酶制剂（哈尔滨神农有限公司）；活性炭（分析纯，上海豪申化学试剂有限公司）；甲醇（色谱纯，天津市大茂化学试剂厂）；水为超纯水；乌索酸对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号110742-200314）。　　1.2仪器B-10D高纯水机(杭州

7、永洁达膜分离设备厂)，CP225D电子分析天平(德国Sartourius公司)，FW100型高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)，202-26A型数显电热恒温干燥箱(上海阳光实验仪器有限公司)。　　1.3乌索酸的提取分离　　1.3.1工艺流程见图1。　　1.3.2操作步骤采用“醇提凝析法”提取分离。将干燥后的毛泡桐叶10kg粉碎成粗粉（20目），用温水湿润，加入原料干重1%的复合酶制剂，38℃酶解处理24h，滤干，加入8倍重量