咳喘落口服液对哮喘模型小鼠肺组织中嗜酸性粒细胞凋亡及调控因素

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1、咳喘落口服液对哮喘模型小鼠肺组织中嗜酸性粒细胞凋亡及调控因素【摘要】观察咳喘落口服液对哮喘小鼠嗜酸性粒细胞（eosinophil,EOS）凋亡及调控因素的影响，旨在进一步阐明咳喘落抑制气道炎症的机制。方法：56只BALB/c小鼠分为正常组、模型组、咳喘落组和西药(强的松龙)组。除正常对照组外，其余各组小鼠用卵白蛋白和硫酸铝钾致敏激发BALB/c小鼠，复制哮喘模型。在不同时相（末次激发后0h，第3、7和14天）分别采用改良的Giemsa染色法检测各组小鼠肺组织中EOS数量；免疫组化结合图像分析方法检测各组小鼠肺组织中Fas、Fas配体（Fasligand,FasL）和Bcl?XL表达的

2、情况；采用TdT介导的带生物素dUTP缺口末端标记技术（terminaldeoxynucleotidyltransferase?mediatedbiotin?dUTPnickendlabeling,TUNEL）检测EOS凋亡率。结果：末次激发后第3、7和14天，哮喘模型组小鼠气道炎症明显，以末次激发后第3天最为严重，而咳喘落组、西药组各时相气道组织炎症均明显减轻，EOS数量低于模型组（P<0.05）。咳喘落组末次激发后第3天，其肺组织内FasL、EOSFas阳性面积和凋亡率较模型组升高，差异有统计学意义（P<0.01），且凋亡率达顶峰，而Bcl?XL的阳性面积及EOS数量

3、低于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）；末次激发后第7和14天，中药组EOS中Fas阳性面积和Bcl?XL的阳性面积较模型组明显下降（P<0.01）；且第14天，其肺组织中FasL表达和EOS凋亡率均明显下降（P<0.01）。西药阳性对照组的作用与中药治疗组类似。结论：哮喘小鼠存在以EOS浸润为主的气道炎症，同时伴有凋亡受抑和凋亡延迟。咳喘落可以提高炎症早期肺组织EOS凋亡率，可能是通过减少EOS，提高FasL、Fas表达和降低Bcl?XL表达实现的。【关键词】支气管哮喘;复方;肺嗜酸性粒细胞增多;细胞凋亡;Fas配体;Fas;Bcl?XL;小鼠　　Objec

4、tive:ToexplorethemechanismofKechuanluooralliquid,apoundChineseherbalmedicine,ininhibitingallergicairmationbyobservingtheeffectsofKechuanluooneosinophil(EOS)apoptosisanditsregulationfactorsinasthmaticmice.Methods:Fifty?sixBALB/cmicelydividedintonormalcontrolgroup(n=16),untreatedgroup(n=16),annhe

5、im公司产品；硫酸铝钾，上海化学试剂有限公司产品，生产批号为020203。　　1.2实验方法　　1.2.1模型分组与处理　　56只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型组、西药对照组和咳喘落组。正常对照组和模型组各16只，西药对照组和咳喘落组各12只。除正常对照组外，根据国外报道[4］的方法略加改动，用卵白蛋白致敏激发BALB/c小鼠，复制哮喘模型。3组小鼠于第1天和第14天予腹腔注射卵白蛋白硫酸铝钾混合液（每毫升含500μg卵白蛋白和100mg硫酸铝钾）0.2ml致敏。第14天鼻内滴入卵白蛋白0.05ml（100μg），第25、26和27天鼻内滴入卵白蛋白0.05ml（50μg）

6、，鼻内滴入前均予腹腔注射0.4%戊巴比妥钠（40mg/kg）。正常对照组用等量生理盐水替代卵白蛋白和硫酸铝钾进行腹腔注射及鼻内滴入。第27至40天，正常对照组和模型组均胃饲生理盐水，咳喘落组灌胃咳喘落口服液30ml/(kg·d)，西药对照组灌胃强的松龙片10mg/(kg·d)。于末次激发后当天（第27天），对照组和模型组分别随机处理4只，末次激发后第3（第30天）、7（第34天）和14天（第41天），各组分别随机处理4只，收集左上肺组织标本待测。　　1.2.2组织学及光镜观察　　肺组织用10%甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察并拍照。　　1.2.3肺组织中EOS测定　　应

7、用改良的Giemsa染色法［5］，EOS核呈蓝色，颗粒呈红色。测定前先用细胞计数板上的刻度对系统进行定标，随机选取内径0.1～0.2mm的细支气管作为测定对象，通过显微镜×400倍摄取图像，胞浆内颗粒呈红色为阳性细胞。每张切片随机取3个视野，取其均值为阳性细胞数，即EOS计数。　　1.2.4肺组织中EOS凋亡检测　　采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的带生物素dUTP切口末端标记技术（terminaldeoxynucleotidyltransferase?med