止咳平喘合剂对哮喘大鼠嗜酸性粒细胞凋亡及细胞因子的干预作用

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1、前言支气管哮喘（哮喘）是一种由多种细胞和细胞组分介导的慢性气道炎症性疾病，同时这种慢性炎症导致气道高反应性的增加，通常出现广泛多变的可逆性气流受限，并引起反复发作的喘息、气急、胸闷或咳嗽等症状，常在夜间和（或）清晨发作、加剧，多数患者可以自行缓解或治疗后缓解。哮喘是一种严重危害人体健康的慢性疾病，近年来哮喘的患病率呈上升趋势，并逐年增加，全球哮喘患者约有3亿，本病严重影响了患者的生活质量及生命。哮喘发病过程中气道慢性炎症是哮喘的本质，在哮喘气道炎症中，大量的炎性细胞如嗜酸性粒细胞（Eosinophil，E0S）、淋巴细胞、中性粒细胞和肥大细胞等和多种炎性介质参

2、与其病理过程。在诸多炎性细胞中，E0S浸润是哮喘气道炎症的病理基础之一，与哮喘气道变应性炎症发生的关系尤为密切[1]。目前认为，EOS是气道炎症反应的主要效应细胞，其他细胞多数通过EOS而产生效应[2]。目前对本病的治疗以抗炎解痉为主，糖皮质激素为治疗哮喘的第一线药物，吸入疗法则是治疗哮喘主要的给药途径，但吸入制剂价格昂贵，且需长期使用，长期用药带来的不良反应绝不容忽视，使用全身激素的副作用则更加明显。目前有关哮喘发病机制的研究很多，由于哮喘的气道炎症与Eos浸润存在密切联系，减少Eos浸润有助于哮喘气道炎症的消退[3]，而Eos凋亡增加可以减少浸润的Eos数

3、量[4]。近来研究发现在哮喘气道炎症中存在细胞凋亡现象，初步显示凋亡可能是炎症反应消退的一种途径[5]。其中凋亡发生的调节涉及许多基因，包括凋亡抑制基因、凋亡促进基因和凋亡效应基因。B细胞淋巴瘤/白血病-2（B-celllymphoma/leukemia-2，Bcl-2）基因是人们近年来广泛重视并研究的一种原癌基因，它是目前为止被认为最重要的凋亡抑制基因[6]，可抑制Eos，肥大细胞，淋巴细胞等多种细胞的凋亡。Bcl-2在Eos凋亡中研究最多，具有促进Eos生长、抑制其凋亡的作用，从而延长Eos生存时间，加重气道炎症。另一方面对于哮喘气道炎症的调控，肺内有多种

4、类型细胞以及细胞因子发挥重要作用，并且这些细胞因子在局部构成复杂的细胞因子网络[1]。当机体发生炎症时，这些细胞因子相互作用，形成一套复杂的细胞因子网络体系，其中致哮喘的细胞因子占优势从而发生支气管哮喘改变。近年来关于哮喘发病机制中辅助性T细胞（helperTcell，Th）1/Th2类细胞因子失衡学说得到了较广泛认可。其中γ-干扰素（Interferon-γ，IFN-γ），白介素（Interleukin，9万方数据IL）-4分别是Th1，Th2细胞产生的重要的细胞因子，它们表达的增高和降低，间接地反映了Th1、Th2之间的亚群失衡。IL-4对气道炎症的发展起

5、主导作用，可促进B细胞增殖并诱导其分化为浆细胞，产生免疫球蛋白E（ImmunoglobulinE，IgE），参与哮喘炎症的发生与发展[7]，而IFN-γ能抑制IL-4诱导的IgE的分泌，抑制Th2细胞的增殖，减少IL-4的产生[8,9]，即IFN-γ抑制IL-4的产生，反之IL-4抑制IFN-γ的功能。止咳平喘合剂是全国名老中医王晖的经验方，由炙麻黄、杏仁、生甘草、枳壳、三叶青、广地龙、黄芩、桑白皮、羊乳、苏子、白芥子、莱菔子组成，在临床哮喘患者的治疗上疗效显著。本实验采用卵白蛋白多点注射复制大鼠哮喘模型，旨在观察造模后大鼠病理变化，血清中IL-4、IFN-γ

6、水平的变化，以及凋亡抑制基因Bcl-2表达水平的情况，通过研究止咳平喘合剂对哮喘大鼠Eos的凋亡及细胞因子的干预作用，探讨其治疗哮喘的可能的作用机制，为其在临床上的应用提供理论依据。10万方数据一、材料与方法（一）实验材料1.实验室浙江中医药大学动物实验中心浙江省中医院呼吸功能实验室浙江大学医学院病理和法医研究所浙江省儿保医院病理科2.实验动物健康成年雄性SD大鼠，清洁级，体重200±20g，共60只，由浙江中医药大学动物实验中心提供。实验动物饲养于浙江中医药大学动物实验中心三级实验动物房内。整个实验过程大鼠自由摄食（普通专业饲料）、饮水（自来水）。3.实验药

7、物及试剂（1）卵白蛋白（ovalalbumin，OVA）由美国Sigma公司提供，临用前配制。AL(OH)3由NaOH和Alcl3反应生成。止咳平喘合剂:止咳平喘合剂由本校中药制剂室制成流浸膏，含生药2.0g/ml（批号：20081030）（2）阳性对照药物：强的松片（5mg/片，浙江仙居制药股份有限公司，批号：071089）。灌胃前用生理盐水稀释至1mg/ml。（3）IFN-γ试剂盒批号：20081222晶美生物工程有限公司（4）IL-4试剂盒批号：20081222晶美生物工程有限公司（5）Bcl-2免疫组化一抗上海基因公司（6）Envisim试剂盒上海基因

8、科技公司（DAKO公司）4.主要仪器O