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《莱芜地区乙型肝炎病毒基因型及临床意义的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、莱芜地区乙型肝炎病毒基因型及临床意义的研究我们应用聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性基因分型的方法对莱芜地区人群HBV基因分布进行研究,在分子水平阐明不同基因型的流行。探讨莱芜地区基因型的分布、基因型与病毒康墓叵怠⒒蛐陀肓俅脖硇偷墓叵担蛐陀際BeAg的关系，更好地了解莱芜地区优势流行株及不同基因型复制能力与毒性,为以后指导临床病情分析及治疗提供理论依据。1材料与方法1.1研究对象血清标本来自我院的HBV-DNA阳性的乙肝病毒感染者136例,其中男104例,女22例,年龄11～74岁。诊断根据2000年西安会议修订的标准[2
2、],其中乙型肝炎表面抗原携带者(ASC)17例,慢性乙型肝炎(CHB)轻度21例,中度38例,重度14例,重型肝炎(FH)15例,肝硬化(LC)22例,肝癌(HCC)9例,所有患者均排除其他病毒性肝炎及自身免疫性肝炎。留取清晨空腹静脉血,分离血清,血清分别冻存于-70℃及-20℃冰箱备用。1.2方法1.2.1血清标志物检测应用化学发光法,其操作及判定方法严格按照说明书进行。1.2.2乙型肝炎病毒DNA定量检测采用实时跟踪荧光定量PCR，检测下限为1.0×103copies/ml,具体操作如下:血清标本100ul加入50ul裂解液,
3、96℃10min，12000g离心10min,取上清加入10×PCR扩增系统管中,同时设置阴性对照和阳性对照,放入PCR仪中,使用说明的PCR程序(95℃2min,然后95℃15s、52℃40s)进行40个循环,反应结束后,通过电脑分析直接定量结果,专人操作。1.2.3HBV基因分型采用限制性片段长度多态性分析(RFLP)及序列测定法,参考文献所述方法进行。1.3试验结果的统计学处理用SPSS10.0软件,计量资料采用t检验，样本构成比的比较采用x2检验，多个均数间的比较采用单向方差分析，年龄呈非正态分布,取对数后呈正态分布,采用
4、两样本均数比较。2结果2.1136例HBV感染者基因型分布情况及HBVDNA载量水平莱芜地区HBV感染者基因型以C型为主，占68.4%（93/136），B型占19.1％（26/136），B+C混合型占12.5％(17/136)，未发现A、D、E、F、G、H型。病毒载量均值从B型、混合型到C型依次升高,B型载量水平显著低于C型及混合型;C型及混合型间比较无差异(单向方差分析F=12.18,P<0.01)。2.2HBV感染者基因型与年龄的关系从HBV携带者到慢性乙型肝炎轻度、中度、重度以及重型肝炎、肝硬化、肝细胞癌，年龄逐渐增大
5、。在HBV携带者和轻度慢性乙肝患者组中，C型、混合型与B型年龄比较，差异有显著性(P<0.01)，说明C型、混合型乙型肝炎病毒感染者较B型感染者年龄大，其他组未见明显差异(P>0.05)。2.3HBV感染者基因型与性别的关系各基因型中男性患者均多于女性,但男性、女性各种基因型构成比经统计学处理，均无显著性差异(P>0.05)。2.4临床表型与基因型的关系B型中ASC比例（30.9%）显著高于C型、混合型ASC比例（9.7%、0%），x2=8.32,P<0.01。B型中CHB轻度所占比例（26.9%）显著高于
6、C型、混合型CHB轻度比例（12.9%、11.8%），x2=4.57,P<0.05。在CHB重度、重型肝炎、肝硬化患者中，B型的比例显著低于C型、混合型，x2值在3.89-10.64之间，P值均小于0.05。C型基因型在HBV携带者、慢性乙型肝炎轻度、中度、重度以及重型肝炎、肝硬化的比例依次升高，分别为52.9%、57.1%、69.6%、71.4%、73.3%、77.3%，提示C基因型与严重肝损害有关。2.5B型、C型和HBeAg的关系在慢性乙肝病毒感染者中，C基因型患者HBeAg阳性者显著高于B基因型患者，x2=10.38
7、，P<0.01。混合型由于例数较少，未列入统计。3讨论HBV的流行情况除与病毒本身的生物学特性如血清型、基因型、基因变异等有关外，还与卫生状况、生活习惯以及人体免疫遗传特征等因素有关。不同基因型的HBV的复制能力和逃逸宿主免疫压力的能力不同,从而导致不同地区HBV感染率和基因型分布呈一定的地理流行病学特征。国内外研究证实，HBV感染者基因型分布呈现明显的地域性差异，反映了HBV自然感染过程中的变异特点和病毒基因遗传性的差异，是病毒进化的结果。近年来，国内外学者已做过关于基因型的研究，在疾病进展的不同阶段中，不同基因型的感染不
8、一样，认为基因型与HBV的传播方式、临床经过、病情转归以及临床疗效有一定的关系。经河北、湖南、广西、广州、兰州、吉林、江苏、香港等地的研究表明[3],我国HBV基因型存在A-F型，以B、C型为主，但各地优势基因型存在一定的差异，北方以C型为主，而南
