甲基强的松龙对成骨细胞钙通道电流的影响

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1、甲基强的松龙对成骨细胞钙通道电流的影响：贾丙申，陈燕平，高云，张文杰，薛延【摘要】　　目的：观察甲基强的松龙（mPSL）对MC3T3E1成骨细胞L钙通道电流（Ltypevoltagesensitivecalciumchannelscurrent，LVSCCsC）的影响。方法:设A组（正常对照组）、B组（106mol/L）、C组（105mol/L）和D组（104mol/L），各浓度的mPSL作用24h后，膜片钳技术记录每组细胞的LVSCCsC（nA）。结果：正常对照组峰值电流为（-0.2

2、284±0.0209，nA）；106mol/L组为（-0.1991±0.0158,nA）下降12.8%；105mol/L和104mol/L组分别为（-0.1839±0.0179，nA）、（-0.1610±0.0033，nA）分别下降19.5%和29.5%,与正常对照组比较有显著性差异（P<0.01）。结论：mPSL剂量依赖性抑制成骨细胞LVSCCsC。【关键词】膜片钳技术；钙通道电流；甲基强的松龙；成骨细胞［ABSTRACT］Objective:Toobservetheinfluenceo

3、fmethylprednisoloneontheCa2+channelcurrentsinosteoblasts.Methods：Allol/L)、C(105mol/L)andD(104mol/L).Theptechniquechannelscurrent(LVSCCsC).Results:Themeanpeakcurrentofcontrolgroupchannelsdosedependently.　　［KEYethylprednisolone;Osteoblast甲基强的松龙（methylp

4、rednisolone，mPSL）是一种人工合成糖皮质激素，具有强力抗炎作用、免疫抑制作用及抗过敏作用［1］,其对成骨细胞呈双向作用，生理浓度促进成骨细胞分化；超生理浓度长期使用可抑制成骨细胞分化、增殖,使成熟的、具有功能的成骨细胞数目减少［2］。大量研究表明兴奋性细胞的钙通道电流与细胞功能有着密切的联系,但是成骨细胞钙通道电流的研究鲜见报道。本实验运用膜片钳技术观察mPSL对成骨细胞LVSCCsC的影响。　　1材料与方法　　1.1试验细胞　　成骨细胞（MC3T3E1细胞株，购于协和细胞中心）传代培

5、养。原代成骨细胞用0.125％的胰蛋白酶，37℃水浴消化5min，收集细胞悬液，1000r/min离心10min，弃上清，传于培养皿中，用含20％胎牛血清的IMDM培养，置于CO2孵箱。实验温度(22±2)℃。培养48h后备用，每株传2～4代。实验时用浴液完全置换培养基。　　1.2mPSL的配制和组别设计　　mPSL（批号H20040338，PharmaciaNV/SA生产，40mg/瓶），溶解后，取12.5μL原液，加入细胞浴液112.5μL，标记A液；取12.5μL原液，加细胞浴液1237.5μL，

6、标记B液；取12.5μL原液加细胞浴液12487.5μL，标记C液。从备用液体A、B和C中分别取12.5μL，置于终末液体体积为1mL的培养皿中，mPSL的浓度为104mol/L、105mol/L和106mol/L。传代后的细胞分为4组，正常对照组、104mol/L组、105mol/L组和106mol/L组，每组记录10个成骨细胞钙离子电流。除正常组外，各组依次（每个皿）给予A、B和C液12.5μL，作用24h后进行膜片钳实验。　　1.3钙通道记录细胞浴液及电极液（单位均为mmol/L）［3

7、］细胞浴液：NmethylDglucamine(NMDG+)110，BaCl2·2H2O20，HEPES10，glucose10，pH=7.4(NMDG+缓冲)。电极液：NMDG+100，HEPES150，EGTA20，CaCl2·2H2O，MgCl2·6H2O，pH=7.4(KCl缓冲)。　　1.4全细胞记录模式纪录Ca2+离子电流电极由硬质玻璃毛胚（内径1.6mm，壁厚0.2mm）经二次拉制而成，充以电极内液后阻抗1～4MΩ。用微电极操纵器将电极缓慢推向细胞，负压吸引形成高阻封接后吸破电极尖端

8、上的细胞膜形成全细胞记录模式，然后补偿膜极电容和串联电阻。电压钳制脉冲和数据采集由Pclamp软件（美国AxonInstrument，6.02）控制，刺激信号经D/A转换器（1200A/D、D/A，AXON.INC，美国）和膜片钳放大器（Axonpatch200B,美国），在电极内形成钳制电压。电流信号经膜片钳放大器输入到模/数(A/D)转换卡，变成数字化信号输入计算机，其数字化频率为1kHz，低通滤波器滤波频率为1kHz。参考文献［2］