基因重排检测技术诊断脾脏淋巴瘤

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1、基因重排检测技术诊断脾脏淋巴瘤【摘要】目的:利用B和T淋巴细胞产生的抗原受体分子基因重排检测技术，探讨1例原发性脾脏恶性淋巴瘤(PLS)基因重排检测结果.方法:从组织蜡块中切取组织片5~10张，提取基因组DNA，PCR扩增，聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染显示基因重排结果.结果:脾脏淋巴瘤免疫组化证实为B细胞性滤泡性淋巴瘤.从24个不同部位取得的组织经PCR均扩增成功，所有部位组织T细胞受体基因重排阴性，22个部位组织B细胞单克隆性免疫球蛋白基因重排阳性，基因重排阳性率91.7%.结论:应用PCR法检测B淋巴细胞IgH和T淋巴细胞TCR基因重排可作为淋巴细胞的良、恶性病变的一种辅

2、助诊断手段，对脾脏淋巴瘤有较高的诊断价值.　　【关键词】淋巴瘤；基因重排；聚合酶链反应；脾脏　　【Abstract】AIM:ToassessthesignificanceofdetectingthegenerearrangementsofIgHandTCRinthediagnosisofprimarymalignantlymphomaofthespleens(PLS).METHODS:TplesdifferentplacesofthePLS.GenomicDNAplifiedviaPCR.Theproductsidegelsandvisualizedthroughsilv

3、erstaining.RESULTS:Allsamplesplified.GenerearrangementsofIgHandTCRphoidhyperplasia.Inallofthe24samplesfromPLS,generearrangementsofTCRγandTCRβentsples(91.7%).Therearkabledifferencebetent(P<0.05).CONCLUSION:DetectionofthegenerearrangementsofIgHandTCRbyPCRcouldbeakindofsubsidiarymeanstodi

4、agnosethelymphoproliferativedisease.Itisveryhelpfulinthediagnosisofspleniclymphoma.　　【Keyphoma;generearrangement;polymerasechainreaction;spleen　　0引言　　恶性淋巴瘤(malignantlymphoma)是脾脏最常见的恶性肿瘤，通常为全身性疾病的一部分.原发性脾脏淋巴瘤(primarylymphomaofthespleen,PLS)少见，占所有淋巴瘤的1%~3%.通过基因重排，机体产生大量多样的重排构型，编码种类繁多的抗原特异性抗

5、体.但对于一个个体及其后代，只含有其独特的重排构型，也就是说，一个T,B细胞或其克隆性后代，均只含一种独特的分子遗传学标记.一旦某一克隆的淋巴细胞发生恶性变化,即可呈现特异的基因重排［1］.因此,对基因重排类型进行检测可用于对淋巴细胞增殖性疾病的诊断.我们应用这一手段，探讨1例脾脏淋巴瘤的基因重排检测结果，并对该技术在脾脏淋巴组织增生性病变中的诊断价值进行探讨.　　1材料和方法　　1.1材料　　脾脏恶性淋巴瘤标本1例来自第四军医大学第二附属医院病理科.女，69岁.已排除淋巴瘤或白血病累及脾脏.标本为40g/L中性甲醛液固定,石蜡包埋.制备厚度为4μm的切片6张，贴于载玻片

6、上，常规烤片、二甲苯脱蜡、酒精冲洗，切片自然干燥.用无菌双面刀片将组织刮入1.5mL的离心管中，按以前的方法［2-3］提取基因组DNA.引物序列由上海生工生物工程技术公司合成.引物序列为:β球蛋白基因内对照PC03：ACACAACTGTGTTCACTAGC,PC04：CAACTTCATCCACGTTCACC;免疫球蛋白基因重排(IgH)FR3A：ACACGGCTGTGTATTACTGT,LJH：TGAGGAGACGGTGACC,VLJH：GTGACCAGGGTACCTTGGCCCCAG;T细胞受体基因重排(TCRβ链和γ链)Db1:CAAAGCTGTAACATTGTGG

7、GGAC,Jb2:AGCACTGTGAGCCTGGTGCC,TVG:AGGGTTGTGTTGGAATCAGG,TJX:CGTCGACAACAAGTGTTGTTCCAC,Vγ11:TCTGGAGTCTATTACTGTGC,Vγ101:CTCACACTCTCACTTC,Jγ12:CAAGTGTTGTTCCACTGCC,Jp12:GTTACTATGAGCTAGTCC.　　1.2方法　　PCR扩增在PT200型热循环仪（MJResearch）上进行.反应体系为25μL，含10mmol/LdNTP（GibcoBRL）2μL，10×缓冲