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1、基因重排检测技术诊断脾脏淋巴瘤论文朱少君李艳红张伟王姝妹巩丽兰淼【摘要】目的:利用B和T淋巴细胞产生的抗原受体分子基因重排检测技术，探讨1例原发性脾脏恶性淋巴瘤(PLS)基因重排检测结果.方法:从组织蜡块中切取组织片5~10张，提取基因组DNA，PCR扩增，聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染显示基因重排结果.结果:脾脏淋巴瘤免疫组化证实为B细胞性滤泡性淋巴瘤.从24个不同部位取得的组织经PCR均扩增成功，所有部位组织T细胞受体基因重排阴性，22个部位组织B细胞单克隆性免疫球蛋白基因重排阳性，基因重排阳性率91.7%.结论:应用PCR法检测B
2、淋巴细胞IgH和T淋巴细胞TCR基因重排可作为淋巴细胞来源的良、恶性病变的一种辅助诊断手段.freelentsofIgHandTCRinthediagnosisofprimarymalignantlymphomaofthespleens(PLS).METHODS:TplesdifferentplacesofthePLS.GenomicDNAplifiedviaPCR.Theproductsidegelsandvisualizedthroughsilverstaining.RESULTS:Allsamplesplified.Gene
3、rearrangementsofIgHandTCRphoidhyperplasia.Inallofthe24samplesfromPLS,generearrangementsofTCRγandTCRβentsples(91.7%).Therearkabledifferencebetent(P0.05).CONCLUSION:DetectionofthegenerearrangementsofIgHandTCRbyPCRcouldbeakindofsubsidiarymeanstodiagnosethelymphoprolifera
4、tivedisease.Itisveryhelpfulinthediagnosisofspleniclymphoma.【Keyphoma;generearrangement;polymerasechainreaction;spleen0引言恶性淋巴瘤(malignantlymphoma)是脾脏最常见的恶性肿瘤，通常为全身性疾病的一部分.原发性脾脏淋巴瘤(primarylymphomaofthespleen,PLS)少见，占所有淋巴瘤的1%~3%.通过基因重排，机体产生大量多样的重排构型，编码种类繁多的抗原特异性抗体.但对于一个个体
5、及其后代，只含有其独特的重排构型，也就是说，一个T,B细胞或其克隆性后代，均只含一种独特的分子遗传学标记.一旦某一克隆的淋巴细胞发生恶性变化,即可呈现特异的基因重排［1］.因此,对基因重排类型进行检测可用于对淋巴细胞增殖性疾病的诊断.我们应用这一手段，探讨1例脾脏淋巴瘤的基因重排检测结果，并对该技术在脾脏淋巴组织增生性病变中的诊断价值进行探讨.1材料和方法1.1材料脾脏恶性淋巴瘤标本1例来自第四军医大学第二附属医院病理科.女，69岁.已排除淋巴瘤或白血病累及脾脏.标本为40g/L中性甲醛液固定,石蜡包埋.制备厚度为4μm的切片6张
6、，贴于载玻片上，常规烤片、二甲苯脱蜡、酒精冲洗，切片自然干燥.用无菌双面刀片将组织刮入1.5mL的离心管中，按以前的方法［2-3］提取基因组DNA.引物序列由上海生工生物工程技术公司合成.引物序列为:β球蛋白基因内对照PC03：ACACAACTGTGTTCACTAGC,PC04：CAACTTCATCCACGTTCACC;免疫球蛋白基因重排(IgH)FR3A：ACACGGCTGTGTATTACTGT,LJH：TGAGGAGACGGTGACC,VLJH：GTGACCAGGGTACCTTGGCCCCAG;T细胞受体基因重排(TCRβ链
7、和γ链)Db1:CAAAGCTGTAACATTGTGGGGAC,Jb2:AGCACTGTGAGCCTGGTGCC,.freelmol/LdNTP（GibcoBRL）2μL，10×缓冲液2.5μL，50mmol/LMgCl20.75μL，TaqDNA聚合酶（GibcoBRL）16.67nkat，20pmol/L引物1μL，DNA样品1~5μL.IgH基因采用半巢氏PCR扩增:第1轮引物为FR3A和LJH,95℃预变性3min,然后94℃变性40s,62℃退火50s,72℃延伸40s,共30个循环;最后72℃延伸10min.扩增产物经
8、1∶100稀释后取1μL进行第2轮扩增,引物为FR3A和VLJH,95℃预变性3min，然后94℃变性40s，60℃退火50s,72℃延伸40s,共30个循环;最后72℃延伸10min.FR3A与VLJH扩增产物为100~120bp.TCRβ和TC
