克隆性基因重排在淋巴瘤诊断中的应用

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1、中华病理学杂志2010年5月第39卷第5期ChinJPathol，May2010，Vo1．39，No．5347·．讲座．克隆性基因重排在淋巴瘤诊断中的应用周晓燕大多数淋巴组织增生性病变通过组织形态学和免疫表构变化，使限制性内切酶位点发生改变，用特异性位点探针型可得出肯定诊断，大约有5％～10％的病例表现复杂，即杂交后产生除胚系条带外不同的条带，而没有发生重排的基使做大量的免疫标志可能也难以鉴别其良恶性，免疫球蛋白因仅产生特征性的胚系条带。Southern印迹结果稳定，和T细胞受体(TCR)基因克隆性重排可作为重要的辅助指被认为是基因重排检测的金标准，但它需DNA量大，需新鲜标协助诊断，其

2、基本原理是淋巴瘤(或其他淋巴细胞性恶性或冻存组织，耗时长，目前许多实验室不再或不常采用，仅仅肿瘤)起源于单个恶性转化的淋巴细胞，相同的克隆具有相在结果可疑或验证时备用。聚合酶链反应(PCR)利用免疫同的基因重排方式⋯。球蛋白或TCR基因重排过程中VDJ区互相靠拢的特征，通一、免疫球蛋白和TCR基因结构及其重排过适当的家族引物或通用引物，可扩增出特征性的、在一定免疫球蛋白基因包括重链基因IgH(14q32)、K轻链基范围内的基因片段，而胚系基因在PCR引物结合位点之间因lgK(2pl1)和轻链基因Ig[(22ql1)，TCR基因包括有很长的距离无法扩增出，多克隆性重排时不同细胞产生不TCR

3、A(14ql1)、TCRB(7q34)、TCRG(7pl5)和TCRD同重排方式，不产生特异性产物。PCR法可以用新鲜、冻存、(14ql1)。每一个免疫球蛋白和TCR胚系基因(为非重排状石蜡、显微切割或细胞学标本，仅需要少量的DNA，时问短，态基因)由分离的编码片段组成，均包括可变区(V)、连接区敏感性高，是目前最常用的克隆性重排的检测方法。(J)、恒定区(C)，在IgH、TCRB和TCRD基因尚包括多样区根据基因重排特点，PCR检测的引物通常选择V、D和(D)J。基因重排是淋巴细胞发育过程中的特征，在淋巴细J区的高度保守区，如在IgH基因，不同家族的V区均有三胞发育的早期，B细胞中的免

4、疫球蛋白基因和T细胞中的个高度保守的框架结构区(FR1、FR2、FR3)，上游引物通常TCR基因发生特定顺序的重排，形成V一(D)一J片段，在形成选择在这三个区，采用通用引物或家族引物，下游引物则选mI~NA时再和下游的C区结合，在B细胞翻译成重链和轻择可识别所有J区的通用引物，还可选择D区和J区作为上链，并组成免疫球蛋白，在T细胞翻译成两种形式的受体，以下游引物的结合点。由于选用引物不同，各实验室的结果可异二聚体存在(仅B和8)。由于V、D、J区均有很多片段能不一致，引物覆盖不全或方法不合适，可能导致检测敏感(如lgH基因有66个V片段、27个D片段和6个J片段)，性的降低J。为了建立

5、可靠又简便的可用于常规克隆性诊导致各基因重排方式多样，再加上重排过程中的核苷酸丢失断的PCR技术，1998年在欧洲开展了一项命名为BMH4一和随机插入等原因使每个淋巴细胞都有独特的重排形式，这C3983936的BIOMED一2协作研究，该协作研究由47个研究保证了正常免疫反应中抗原受体的多样性。各基因的重排所的分子生物学、免疫学、血液学、病理学等领域的专家参有一定的先后顺序：在免疫球蛋白基因是IgH—IgK—IgL，在与，进行了12次国际性会议，设计了一套完整的引物和方法TCR基因是TCRD—TCRG—+TCRB—TCRA¨。用于免疫球蛋白和TCR基因重排的克隆性分析，共有14管淋巴瘤是

6、由于淋巴细胞成熟阻滞于某个阶段发生克隆97对引物，包含了lgH(A，B，C，D，E共5管)，lgK(A，B共性增生，所有细胞具有相同的重排方式即克隆性重排，它是2管)，IgL(1管)，TCRB(A，B，C共3管)，TCRG(A，B共克隆性增生和谱系来源的标志，已被公认为淋巴瘤诊断、鉴2管)和TCRD(1管)，所有引物采用相同的扩增条件和检测别诊断和治疗后监测的重要指标。不同阶段淋巴细胞方法，并具有很高的敏感性和特异性，已被推荐为可疑淋巴起源的T或B细胞淋巴瘤均有克隆性基因重排，但自然杀伤组织增生性疾病克隆性分析的标准方法，试剂已商品化细胞(NK)／T细胞淋巴瘤中免疫球蛋白和TCR基因大多

7、呈(http：／／www．invivoscribe．corn)。PCR产物有两种推荐分析胚系构型，也即没有克隆性基因重排。方法：(1)聚丙烯酰胺凝胶电泳异源双链分析(heterodup

8、ex二、克隆I生基因重排的检测方法analysis)，即将PCR产物95℃变性5min后迅速冷却(4℃)克隆性基因重排可通过合适的方法检测，最早采用的分复性，用6％的聚丙烯酰胺凝胶电泳，单克隆性细胞产生一子检测方法是Southern印迹杂交，其原理是