平肝潜阳法对高血压模型大鼠下丘脑蛋白质表达的影响

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1、平肝潜阳法对高血压模型大鼠下丘脑蛋白质表达的影响【摘要】　　【目的】观察平肝潜阳法对高血压肝阳上亢证模型大鼠下丘脑蛋白质表达差异的影响，从蛋白质组学水平探讨其降血压和改善肝阳上亢证症状的分子机制。【方法】选用自发性高血压大鼠（SHR）灌服附子汤法复制高血压肝阳上亢证大鼠模型，以ＳＤ大鼠作正常对照，治疗组给予天麻钩藤饮加减方灌胃给药（0.1g/mL）；采用二维凝胶电泳（2DE）分离大鼠下丘脑蛋白质，获得差异表达蛋白质；利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDITOFMS）和数据库分析鉴定差异表达

2、蛋白质。【结果】高血压肝阳上亢证大鼠模型复制成功，其易激惹程度、饮水量、收缩压等与正常组比较，差异均有显著性意义（Ｐ＜０.０１）；治疗组给予中药天麻钩藤饮加减方治疗后，易激惹程度好转，饮水量减少，收缩压下降，与模型组比较差异均有显著性意义（Ｐ＜０.０１）。肝阳上亢模型组蛋白质图谱中有5个蛋白质斑点，与正常组比较表达上升2倍及以上，且同一点在平肝潜阳法治疗组中表达下降2倍及以上；有10个蛋白质斑点表达下降2倍及以上，且同一点在平肝潜阳法治疗组中表达上升2倍及以上。【结论】平肝潜阳法治疗高血压肝阳上亢证的作用

3、可能与下丘脑某些蛋白质的改变有关。【关键词】高血压／中药疗法平肝潜阳法蛋白质组学疾病模型动物大鼠　　原发性高血压病（essentialhypertension，EH）是一种常见的心血管系统疾病，具有发病率高、并发症多的特点。流行病学研究提示人群高血压病患病率较10年前明显增高［1］。长期高血压病极易导致心、脑、肾等脏器的器质性病变和功能损害，并最终导致这些器官的功能衰竭。肝阳上亢证是高血压病中的常见证型，据统计在高血压病中约占87.33%［2］。平肝潜阳法是治疗高血压病肝阳上亢证的传统治法，不仅能有效降低

4、患者的血压水平，还可改善患者的生存质量，降低并发症的发生，已有研究从分子、基因等水平探讨其作用机制，取得了有意义的进展［3］。为了进一步从蛋白质水平探讨其作用机制，我们应用差异蛋白质组技术，观察了平肝潜阳法治疗高血压肝阳上亢证大鼠前后下丘脑蛋白质表达谱的变化，现报道如下。　　1材料与方法　　1.1动物正常健康SpragueDain，煎煮２次后再将药液合并浓缩为含生药0.1g/mL。天麻钩藤饮加减方：天麻10g，钩藤20g，石决明30g，牡蛎30g，牛膝10g，均由中南大学湘雅医院中药房提供。石决明先煎20

5、min，钩藤后下，煎煮２次后再将药液合并浓缩为含生药0.1g/mL。　　1.3主要试剂与仪器2DQuantKit蛋白质定量试剂盒、固相pH梯度干胶条（IPGstrippH310L，24cm）、IPGBuffer（PH310L）、覆盖液均由AmershanBiosciences公司提供；二硫苏糖醇（DTT）、丙烯酰胺、甘氨酸、苯甲基磺酸氟（PMSF）、3［（3胆酰胺丙基）二乙胺］丙磺酸（CHAPS）、十二烷基硫酸钠（SDS）、NNN′N′四甲基乙二胺（TEMED）、考马斯亮蓝、琼脂糖均

6、由Sigma公司提供；低分子量标准蛋白质由上海伯奥生物制品公司提供；Trisbase为USB公司分装；碘乙酰胺购自Fluka公司。EttanIPGphorⅡ等电聚焦仪、EttanDALTⅡSystem垂直电泳槽（Amersham公司）；PDQuest7.0分析软件（BioRad公司）；Imagescanner扫描仪（Sigma公司）；Elx800自动酶标仪（BilTekInstruments，Inc）；真空冷冻抽干仪（Ｓavant公司）；4307MALDITOFMS质谱仪（ABI公司）；二道

7、生理记录仪（成都仪器厂）；清醒小动物血压测量器（中南大学湘雅医学院心脏生理研究室）。　　1.4分组与造模正常组SD大鼠10只；治疗组及模型组ＳＨＲ大鼠各１０只，完全随机（随机排列表法）分组。正常组大鼠连续灌服蒸馏水42d，于第43天处死。治疗组及模型组参照鄢东红等［4］的方法，连续灌服附子汤共21d，复制高血压肝阳上亢证模型；自第22天起模型组改为连续灌服蒸馏水21d，治疗组在同一时间灌服天麻钩藤饮加减方，均于第43天处死。模型复制成功的标准参照鄢东红等［4］的方法，观察大鼠的外观及易激惹程度、饮水量、血

8、压的变化（造模前，第3周末，第6周末）。血压测定采用杨绿化等［5］的尾动脉搏动法。各组动物腹腔注射水合氯醛麻醉，快速断头处死，冰上剥离下丘脑，装在标记好的冻存管后放在液氮中保存备用。　　1.5二维凝胶电泳（2DE）分离和分析　　1.5.1蛋白质双向电泳分离采用2DQuantKit蛋白质定量试剂盒的微量测试法测定总蛋白质浓度，蛋白质定量采用Bradford法［6］。蛋白质双向电泳参考IPGhorTM等电聚焦系统操作指南进行。