化学萃取的异种神经修复神经缺损的可行性研究

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1、化学萃取的异种神经修复神经缺损的可行性研究：刘品端，王伟，智晓东，梅晰凡【摘要】　　目的探讨联合应用十二烷基硫酸钠（Sodiumdodecylsulfate，SDS）和脱氧胆酸钠（Sodiumdeoxycholate）的化学萃取方法，对异种神经移植段进行脱细胞处理，构建异种神经去细胞基质膜管，应用于修复周围神经缺损的可行性。方法取新鲜兔坐骨神经，切成长10mm的神经段，用十二烷基硫酸钠（Sodiumdodecylsulfate，SDS）和脱氧胆酸钠（Sodiumdeoxycholate）反复处理新鲜的兔神经段构

2、建成异种神经去细胞基质膜管,修复大鼠坐骨神经缺损。结果4个月后异种神经基质膜管与大鼠坐骨神经缝合处愈合良好，未见有神经瘤及粘连，HE染色显示异种神经基质膜管组桥接处再生神经结构连续性良好,移植段可见神经纤维及新生的血管。S-100免疫组织化学染色可见阳性的雪旺氏细胞沿神经纤维分布成条带状。电镜超微结构观察可见再生的神经纤维较粗大，排列紧密，呈均匀一致圆型或椭圆型，髓鞘较厚，轴突结构完整。结论联合应用十二烷基硫酸钠（Sodiumdodecylsulfate，SDS）和脱氧胆酸钠（Sodiumdeoxycholat

3、e）的化学萃取方法构建的异种神经去细胞基质膜管可以修复大鼠坐骨神经缺损。【关键词】异种神经去细胞基质膜管化学萃取坐骨神经大鼠　　　　Abstract:ObjectiveToexplorethefeasibilityofusingthexenogeneicacellularnervescaffolddealticalextractivemethoddodecylsulfate(SDS)andSodiumdeoxycholatetorestoretheperipheralnervedefect.MethodsFre

4、shsciaticnerveofrabbitdeoxycholate，onthsafteroperation,theanastomosisofthexenogeneicacellularnervescaffoldooth,andtherea,conglutination,inflammationandimmunereaction.HEStainingshoyelinatednervefibersinthexenogeneicacellularnerveunderlightmicroscopy.PositiveS

5、chmunestainingshoentofregeneratednervefibersicalextractivemethoddodecylsulfate(SDS)andSodiumdeoxycholatecanbeappliedintherestorationofperipheralnervedefect.　　Keyicextraction;sciaticnerve;rat　　周围神经缺损是临床上常见的损伤性疾病，当神经纤维断裂长度超过10mm后，缺损的神经多半不能自发修复［1］，目前临床上对于长段神经缺损

6、主要靠自体神经移植来修复，即取相对次要功能的自体感觉神经来修复主要功能的神经干，目前这种修复方式被公认为是治疗神经缺损的“金标准”。但自体神经移植这种“拆东墙补西墙”的方式存在着取材有限、供区功能丧失、形成神经瘤等问题［2］，限制了其临床应用。而异体神经的移植因排斥反应问题在临床上难以实现。近年人们对周围神经的再生有了新的认识——通过构建神经再生室，提供特定的微环境，阻止瘢痕组织长入神经断段，可以修复缺损的神经。　　本实验利用十二烷基硫酸钠（SDS），脱氧胆酸钠作为阴离子型去污剂可以破坏细胞膜并溶解其中的蛋白成

7、份的特性，联合应用十二烷基硫酸钠（SDS），脱氧胆酸钠反复处理新鲜的兔坐骨神经移植段，去除异种神经移植段中引起排斥反应的神经轴突和髓鞘等细胞成分，构建成异种神经去细胞基质膜管来修复大鼠坐骨神经缺损，通过检测术后大鼠坐骨神经的功能恢复情况来探讨其可行性。　　1材料与方法　　1.1主要仪器设备与试剂　　JEM1200EX电镜（日本电子公司），CIAS-1000型细胞图像分析系统（北京大恒视觉图像公司），四通道肌电图仪（丹麦Danteckeypoint），十二烷基硫酸钠（北京华美生物工程公司），脱氧胆酸钠（北京华美生

8、物工程公司），兔抗大鼠S-100（武汉博士得生物工程公司）。　　1.2异种神经去细胞基质膜管的制备　　取新鲜兔坐骨神经，切成长10mm的神经段，按照以下步骤处理：①蒸馏水浸泡12h；②5%SDS（十二烷基硫酸钠）浸泡6h；③5%脱氧胆酸钠浸泡6h。重复以上步骤直至将神经段中的细胞成分处理干净。蒸馏水充分冲洗，无菌PBS4℃保存。　　1.3实验动物、地点及分组　　健康成年新西兰大耳白兔1