去细胞异种神经复合骨髓基质干细胞修复神经缺损的实验研究

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1、内蒙古医学院硕士学位论文去细胞异种神经复合骨髓基质干细胞修复神经缺损的实验研究姓名：景尚斐申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：温树正;崔永武20090501中文摘要目的探讨AXN复合BMSCs构建组织工程神经修复周围神经缺损的效果。方法体外培养大鼠BMSCs，与AXN复合构建TEN；雌性Wistar大鼠60只，随机分为3组，每组20只，建立右坐骨神经10mm缺损修复模型。A组：BMSCs与AXN复合构建TEN桥接神经缺损；B组：单纯AXN桥接神经缺损；C组：自体神经移植组。术后4w、12w依次进行干细胞的转归、TEN的移植免疫、神经电生理检测、

2、再生神经组织学观察、小腿三头肌肌纤维横径等检测判断坐骨神经缺损修复情况。结果1．成功的进行了BMSCs的体外培养和BrdU标记，初始标记率88．36％，免疫组化染色和流式细胞仪检测培养细胞表型CD44(+)、CD90(+)和CD34(一)o2．AXN与新鲜神经相比较细胞和髓鞘被彻底清除，保持了原有的三维仿生结构，免疫原成份被清除，流式细胞仪MHCII检测结果显示AXN免疫原性明显减弱o3．术后4w，流式细胞仪检测外周血CD3+、CIM+和CD8+T细胞百分比三组间无统计学差异，取移植段切片荧光显微镜下可见再生纤维束状排列，只有A组S一100表达阳性

3、细胞其细胞核内有BrdU阳性表达，B、C组均无表达；术后12w神经电生理检测显示，刺激可以通过移植段神经到达远端的效应器，在神经支配区肌肉可以记录到运动诱发电位，跨过移植神经段的传导速度，A、C组无统计学差异，A、B和B、C组有统计学差异；组织形态学观察显示再生的神经纤维通过远端吻合口，A、C组较B组排列整齐，轴突粗大、致密，移植段内有纵行排列分布的SCs形成Bunger带；术后所有动物均有不同程度肌萎缩，肌纤维横经测量结果显示A、C组无统计学差异，A、B和B、C组有统计学差异。结论l、BMSCs与AXN构建的TEN在周围神经缺损修复过程中取得较满

4、意的结果，BMSC作为种子细胞可以在体内存活，并分化为SCso2、本课题构建的TEN(包括AXN和复合BMSCs的AXN)与自体新鲜神经移植相比较无明显免疫排斥反应，这为将来临床应用TEN提供了新的依据。关键词异种去细胞神经组织工程神经神经再生骨髓基质干细胞雪旺细胞TherepairofPeripheralNerveDefectbyAcellularXenogeneicNerverepopulatedwithBMSCsAbstractObjectiveToresearchtheoutcomeofrepairingtheperipheralnerve

5、defectswiththetis-sueengineerednerveconstructedbychemicallyextractedacellularXenogeneicnervegraftsre—populatedwithBMSCs．MethodsBMSCswereculturedinvitroandrepopulatedintoAXNtoreconstructthetissueengineeringnerve．Weestablishedtheinjuredmodelthat60femaleWistarratsweredividedinto3

6、groupsrandomly，20ineachgroup，underwent10mmrightsciaticnervegapsrepairusingoneofthefollowing：(GroupA)TissueengineerednervesconstructedbyAXNrepopulatedwithBMSCs，(GroupB)Tissueengineerednervesconstruc-tedbyAXNand(GroupC)Autologousnervegraft．Tissueswereharvested4weeksand12weeksaft

7、eroperation．ThestatusofBMSCsandaxonalregenerationwereevaluatedbygeneralobservation，electrophysiologicalexamination，gastrocnemiusmusclefibersmeasurement，his-tologicalobservationandscanningelectronmicroscopy(SEM)observation．Result1．WecultivatedBMSCsinvitrosuccessfullyandstudiedi

8、tsbiologicalcharacterization．Growthcurvedisplayedthegreatadap