海马神经元谷氨酸损伤研究

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1、海马神经元谷氨酸损伤研究【摘要】　　目的：本研究通过观察体外培养的大鼠胚胎海马神经元在谷氨酸损伤后，细胞活力变化及细胞损伤的方式，初步探讨谷氨酸对神经元的损伤机制。方法：通过MTT，观察不同浓度(62.5μM、125μM、250μM、500μM)的谷氨酸损伤后不同时间（6h、12h、18h、24h)海马神经元活力的变化。经相差显微镜观察谷氨酸对海马神经元胞体及突起的影响。通过TUNEL、Hoechst染色比较正常培养组和损伤组的凋亡率，分析谷氨酸对海马神经元的损伤作用。结果：MTT结果显示，谷氨酸

2、对体外培养的胎鼠海马神经元有兴奋毒性，在所观察的剂量范围内，随着谷氨酸浓度的增加，作用逐步增强，至500μM达峰值，随着损伤后孵育时间的延长，海马神经元活力逐渐下降。TUNEL和Hoechst染色结果也显示，125μM谷氨酸对体外培养的胎鼠海马神经元有兴奋毒性，主要引起海马神经元的凋亡。结论：谷氨酸对体外培养的胎鼠海马神经元有兴奋毒性,且这种作用呈现剂量相关性。中等剂量（125μM）谷氨酸损伤主要引起海马神经元的凋亡。【关键词】谷氨酸海马神经元TUNEL　　[Abstract]Objective:

3、Toinvestigatethechangesofcellvitalityinculturedhippocampalneuronsafterglutamatestimulation,andthecellularmechanismsinvolvedinneurotoxicity.Methods:Differentconcentrationsofglutamate(62.5μM,125μM,250μM,500μM)bryonichippocampalneurons.Methyl-thiazole-te

4、trazolium(MTT)assayateicroscope,TUNELandHoechstassayate-inducedneurotoxicity.Results:TheresultsofMTTindicatedthatglutamatecouldevokeneurotoxicitytotheculturedhippocampalneurons,andateandtheincubationtimeincreased,theneurotoxicityaugmented.Morphologica

5、lobservation,TUNELandHoechstrevealedthatglutamateinducedhippocampalcelldeathinaprevailingformofapoptosis.Conclusion:Glutamatehaveobviouslyneurotoxicityincultured7～8dayshippopalneuronsinadose-effectcharacter,inatingafterexposuretomediumconcentrationsof

6、glutamateinadelayedtimecourse.　　[Keyate;Hippocampalneurons;TerminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTPnick-end-labeling　　脑卒中以高死亡率和高致残率严重威胁着人类的健康和社会劳动能力。在脑缺血过程中，各种神经递质发生一系列变化，如脑内氨基酸类神经递质大量增加，特别是缺血中心区域。兴奋性氨基酸如谷氨酸(glutamate,Glu)和天冬氨酸(aspartic,Asp)的过量

7、释放是缺血性脑损伤的重要病理机制。据报道谷氨酸受体拮抗剂对脑缺血损伤有很好的保护作用[1]。同样，抑制性氨基酸对脑缺血有保护作用，可拮抗兴奋性氨基酸的毒性[2]。很多学者认为，兴奋性氨基酸和抑制性氨基酸的平衡失调是缺血性脑损伤的原因之一[3]。　　海马是边缘系统的重要组成部分，在学习、记忆、情绪反应及植物性神经功能等方面有重要作用，是老年性痴呆、癫痫等疾病的主要病灶之一，在结构上具有高度序化板层结构和神经元相对独立分布等特点。海马是神经元高度集中的部位，锥体神经元是海马区的主要成分，体外培养的海马

8、神经元，对许多致病因素和化学损害较为敏感，因此在研究神经系统疾病的病理机制及治疗方法中均以海马作为病理模型，如缺血/缺氧、癫痫、衰老和兴奋性毒素等均可引海马的特异性损害。在脑缺血模型中，海马神经元最早出现较严重的损害，并且海马缺血性损害和兴奋性神经毒有关，这可能和海马神经元含有高密度的谷氨酸能受体有关[4]。　　本研究采用胎鼠海马神经元的无血清体外培养，获得高纯度的神经元。通过高分子量神经丝蛋白（neurofilamenthighmolecularinaldeoxynucleoti