川芎嗪对谷氨酸损伤海马神经元的保护作用

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1、川芎嗪对谷氨酸损伤海马神经元的保护作用【摘要】目的观察川芎嗪对谷氨酸损伤海马神经元的保护作用。方法原代培养大鼠海马神经元，培养基中加入1mmol/L的盐酸川芎嗪溶液共同孵育12h后，加入1mmol/L谷氨酸损伤海马神经元20min。采用MTT法检测细胞活性;测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活力的变化;细胞免疫组化检测各组细胞表达AchE。结果川芎嗪可提高谷氨酸损伤后海马神经元的存活率，抑制因谷氨酸损伤引起的细胞内LDH的释放，可促进谷氨酸损伤细胞中AChE的表达。结论川芎嗪对谷氨酸诱导海马神经元损伤有保护作用。【关键词】川芎嗪;谷氨酸;海马神经元:Objectiv

2、eToobservetheprotectiveeffectsofligustrazineonglutamateinducedinjuryinculturedhippocampalneurons.MethodsPrimarilyculturedhippocampalneuronsfromfetalratswereincubatedwithligustrazine(1mmol/L)for12hours,thenglutamate(1mmol/L)wasaddedfor20minutestoinduceinjury.Cellviabilitywasdetectedby

3、MTTassay,andthechangeinLDHactivitywasdeterminedbybiochemicalmethod.Finally,theexpressionofAchEintheculturedneuronswasassayedbyimmuocytochemistry.ResultsLigustrazineimprovedthesurvivalrateofhippocampalneurons10injuredbyglutamate,inhibitedthereleaseofLDHfromthekytoplasminjuredbyglutamat

4、e.TheexpressionofAchEintheinjuredneuronswaspromotedbypretreatmentofligustrazine.ConclusionLigustrazinecansignificantlyexertprotectiveeffectsonthehippocampalneuroninjuryinducedbyglutamate.　　KEYWORDS:ligustrazine;glutamate;hippocampalneuron　海马是边缘系统的重要组成部分，参与学习、记忆、情绪反应及植物神经功能等。原代培养的海马神经元

5、对许多致病因素和化学损害较为敏感，是研究神经元损伤及抗损伤的理想模型。在脑缺血模型中，海马神经元的损伤较为严重，其中兴奋性氨基酸含量增高是海马神经元损伤的原因之一。谷氨酸(glutamate,Glu)是哺乳动物脑内主要的兴奋性氨基酸，参与中枢神经系统的信息传递。但Glu过度释放可产生神经兴奋性毒性，引起神经细胞损伤或死亡。川芎嗪(ligustrazine,10Lig)是从中药川芎总生物碱中分离得到的一种有效活性生物碱。Lig能通过血脑屏障进入中枢神经系统，在脑中快速达到峰值，并持久地存留在大脑内。临床上常用Lig治疗脑缺血，其机制是通过扩张微血管改善微循环，抑制血

6、栓形成，阻断自由基连锁反应，降低细胞内钙离子超载，拮抗氨基酸毒性等途径来实现，具有多靶点、多层次、多环节的脑保护作用[1]。本研究采用体外海马神经元原代培养，观察Lig对Glu损伤海马神经元的保护作用，探讨Lig对脑损伤神经元的保护机制。　　1材料与方法　　1.1材料实验动物采用健康孕期15d孕鼠，由第四军医大学实验动物中心提供;盐酸Lig注射液为哈尔滨三联药业有限公司生产;四甲基偶氮唑盐(MTT)、二甲亚砜(DMSO)、L多聚赖氨酸、阿糖胞苷为美国Sigma公司产品;胰蛋白酶、DMEM培养基为美国Gibco公司产品;胎牛血清为杭州四季青有限公司产品;6孔板/Ⅱ

7、96孔板为丹麦Costar公司产品;乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒为南京建成生物工程研究所产品;其他试剂均为国产分析纯。Olympus倒置相差显微镜(日本)，CO2培养箱(NAPCO公司)，酶联免疫检测仪(美国BIOTek公司)，兔抗大鼠AchE抗体(1∶1000)、羊抗兔IgG(1∶200)、ABC及DAB显色试剂盒(美国VECTOR公司)。　　1.2海马神经元的原代培养[2]健康孕15d的SD大鼠，麻醉后无菌条件下取胎鼠脑，解剖显微镜下取出的双侧海马，去除脑膜和血管，2.5g/L胰酶37℃消化10min，用完全培养基(90%DMEM+10%FBS)终止消化，

8、制成单细胞