紫萍提取物对过氧化氢诱导内皮细胞氧化损伤的保护作用研究

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1、紫萍提取物对过氧化氢诱导内皮细胞氧化损伤的保护作用研究【摘要】目的研究紫萍提取物是否具有保护内皮细胞免受过氧化氢损伤的作用。方法采用MTT比色法筛选紫萍提取物作用于内皮细胞的安全剂量，建立H2O2对内皮细胞的氧化损伤模型，并研究紫萍提取物的保护作用。最后采用检测试剂盒方法分析紫萍提取物作用后内皮细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性变化。结果紫萍提取物的浓度<100μg/ml，作用时间为24h时，无明显细胞毒性。以1mmol/L的H2O2作用于ECV-304细

2、胞1h造氧化损伤模型，10，25，50μg/ml的紫萍提取物具有预防氧化损伤作用，可使细胞的存活率由21.98%分别上升至37.49%，51.71%和64.74%，其机理可能是紫萍提取物能够剂量依赖性的增强SOD，CAT和GSH-Px等酶的活性。但是紫萍提取物无治疗氧化损伤的作用。结论紫萍提取物可以有效保护内皮细胞免受氧化损伤。【关键词】紫萍氧化损伤过氧化氢超氧化物歧化酶过氧化氢酶谷胱甘肽过氧化物酶Abstract：ObjectiveTostudytheprotectiveeffectofSpirodelapolyrrh

3、iza(L.)SchlEidextract(SE)againstthedamagecausedbyhydrogenperoxide(H2O2)inhumanvascularendothelialcells(ECV-304).MethodsNormalECV-304cellsfor24h-96h,orH2O20.125～10mmol/Lfor1～24h,thesurvivalrateofcellsinedbytetrazoliumassay(MTT).ToevaluatetheprotectiveeffectofSEonE

4、CV-304injuryinducedbyH2O2,ECV-304odel,andSEtreatmentgroups.InSEtreatmentgroup,ECV-304lfor24h，beforeorafterH2O21mmol/L(finalconcentration)odelgroupandtheSEtreatmentgroupfor1h.ThesurvivalconditionsofECV-304ore,theactivitiesofSOD,CATandGSH-PxinECV-304cellstreatedlSE

5、inedbythecorrespondingassaykits.Results5，10，25，50μg/mlSEhadnosignificantcytotoxicityonECV-304at24h，but100μg/ml,200μg/ml,and400μg/mlSEmarkedlydecreasedthesurvivalrateat24h.TheviabilityofECV-304mol/LH2O2at1h.PretreatedlSE,thesurvivalrateandtheactivitiesofSOD,CATand

6、GSH-Pxincellsanner.ButSEhadnoprotectiononECV-304injuryinducedbyH2O2.ConclusionSEhasdualeffectsonthesurvivalrateofECV-304invitro,entlSEcanprotectECV-304againstH2O2injury.Key的微孔过滤器过滤。RPMI-1640培养基、胎牛血清购自GIBCO公司；SOD，GSH-Px，CAT测定试剂盒均购自南京建成生物研究所；MTT购自Sigma公司。2方法2.1ECV-

7、304的培养ECV-304培养于含10%的胎牛血清的RPMI-1640培养液中，置于37℃的细胞培养箱中（5%CO2），待细胞铺满培养瓶80%～90%左右时，用0.25%胰酶＋0.02%EDTA的消化液进行传代培养。2.2四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法MTT溶解于PBS中，配成5mg/ml的溶液，0.22μm的微孔滤膜过滤后避光保存，于一周内用完。在加入MTT前，吸弃培养板中各孔的培养液，PBS洗1～2次，然后加入新鲜培养液和10%的MTT，于细胞培养箱中培养4h后，吸弃培养液，加入200μl的DMSO，在振荡器上振荡1

8、0min，待充分溶解后，于Model550多孔酶标仪570nm处检测吸光值。2.3SE对ECV-304细胞的影响（4～5）×104个/ml密度的ECV-304细胞接种于96孔培养板中，每孔100μl。培养24h后，吸弃培养液，加入含药培养液，SE的终浓度分别为5，10，25，50，100，200，400μg/ml，另