serp1对过氧化氢诱导内皮细胞凋亡的保护作用

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1、serpl对过氧化氢诱导内皮细胞凋亡的保护作用［摘要］目的探讨内质网应激相关蛋白1(serpl)对体外过氧化氢诱导大鼠血管内皮细胞凋亡的保护作用。方法体外培养的大鼠血管内皮细胞均匀种于6孔板内，分为空质粒组、空质粒+过氧化氢组、serpl质粒组、serpl质粒+过氧化氢组。根据不同的实验目的各组加入不同浓度的过氧化氢。用PI/hochest焚光染色法对400Pmol/L过氧化氢组进行细胞凋亡的检测；米用细胞划痕实验检测100umol/L过氧化氢组进行伤口修复情况；采用Westernblot法观察

2、serpl过表达对GLP-1R表达的影响。结果serpl质粒+过氧化氢组内皮细胞凋亡率明显低于空质粒+过氧化氢组，而修复率却明显高于转染空质粒过氧化氢组，差异均有统计学意义(P［关键词］内)贞网应激相关蛋白1;GLP-1党体；血管内皮细胞［中图分类号］R363［文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2016)10(a)-0013-04ProtectiveeffectofserplonendothelialcellsinducedbyhydrogenperoxideFENGLishuaiW

3、ANGQianqianMAXuWEILiWANGJianboTheSixthPeople’sHospitalAffiliatedtoShanghaiJiaoTongUniversity，Shanghai200023，China[Abstract]ObjectiveToinvestigateendoplasmicreticulumstressassociatedprotein1(serpl)’sprotectiveeffectontheapoptosisofvascularendothelialc

4、ellsinducedbyhydrogenperoxide.MethodsRatvascularendothelialcellswereplantedin6-wellplatesandthendividedintotheemptyplasmidtransfectiongroup，emptyplasmid+hydrogenperoxidegroup，serplplasmidgroup,serplplasmid+hydrogenperoxidegroup,differentconcentration

5、sofH2O2wereaddedaccordingtodifferentexperimentalobjective.FluorescencePl/hocheststainwereusedtodetectthecellapoptosisamonggrouptreatedwith400umol/Lhydrogenperoxide；andcellscratchtestwereusedtoobservewoundrepairingamonggrouptreatedwith100umol/Lhydroge

6、nperoxide；theGLP-1receptorexpressionweremeasuredbyWesternblot.ResultsComparedwithemptyplasmid+hydrogenperoxidegroup，endothelialcellsapoptosisratewassignificantlyloweramongtheserplplasmid+hydrogenperoxidegroup，therepairingratewassignificantlyhigher，th

7、edifferencewasstatisticallysignificant（P1对象与方法1.1对象大鼠血管内皮细胞（RAOEC，ATCC）；DMEM高糖培养基、胎牛血清（美国Gibco公司）；PCMV6-SERPUGFP质粒、PCMV6-empty质粒（美国oriGENE公司）;荧光倒置显微镜（德国Zeiss公司）、一抗GLP-1R（美国Novus公司）、一抗serpl（美国Abeam公司）、一抗3-actin（美国CellSignaling公司）;Lipofectamine2000（美国I

8、nvitrogen公司）；Opti-MEM（美国GIBCO公司）；BCA蛋白测定试剂盒（上海碧云天生物科技有限公司）。1.2内皮细胞转染及药物处理将处于最佳生长期的内皮细胞接种于6孔板中，用未添加抗生素的含10%FBS高糖DMEM培养基于37°C>5%CO2孵箱中培养。在6孔板上标记空质粒组;空质粒+过氧化氢组；serpl质粒组、serpl质粒+过氧化氢组，以便后续转染及药物处理等实验操作。待细胞达到80%左右，开始转染。先在Nanodrop2000分光光度仪上测定PCMV6-SERPl-tGF