盐酸川芎嗪对过氧化氢诱导的人神经母细胞瘤细胞氧化应激损伤的保护作用的研究

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1、盐酸川芎嗪对过氧化氢诱导的人神经母细胞瘤细胞氧化应激损伤的保护作用的研究TheprotectiveeffectsofLigustrazinehydrochlorideagainstH2O2-induceddamageinSH-SY5Ycells作者姓名：胡熙桐领域（方向）：外科学指导教师：黄海燕副教授类别：临床医学硕士答辩日期：2015年6月4日前言本文旨在通过利用过氧化氢（H2O2）及人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y），建立体外的氧化损伤模型，并应用不同浓度的盐酸川芎嗪进行实验，研究盐酸川芎嗪对H2O2

2、诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用及可能机制。主要通过建立体外氧化应激损伤模型，摸清最适合的损伤药物浓度和损伤时间，并给予模型不同浓度的保护剂预处理，再根据MTT、流式细胞仪、Westernblot等检测方法证明盐酸川芎嗪对于H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤存在保护作用，并研究其保护作用可能是通过下降基质金属蛋白酶-9的表达来实现的。中文摘要目的:通过应用H2O2和盐酸川芎嗪建立体外的SH-SY5Y细胞氧化损伤及保护模型，并经过MTT、流式细胞仪、Westernblot等检测手段检测：1、盐

3、酸川芎嗪是否对过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞的氧化应激损伤有保护作用。2、在此基础上，进一步分析该保护作用可能的分子机制。方法:1)建立H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤的体外模型及损伤保护模型;2）MTT比色法检测细胞增殖状况；3)流式细胞仪测定细胞凋亡;4)Westernblot法检测MMP-9的表达。结论：1）H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化应激损伤模型的最适浓度为200μmol/L,H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化应激损伤模型的最适时间为2小时。2)盐酸川芎嗪对H2O2诱导的SH-SY5Y细

4、胞的氧化应激损伤具有保护作用，且保护作用与药物浓度呈正相关。3)本实验可以证明盐酸川芎嗪的保护作用可能是通过下调MMP-9的表达而产生。关键词：盐酸川芎嗪，氧化应激，基质金属蛋白酶-9（MMP-9），人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）IAbstractPurpose:ThisstudywasconductedtodeterminetheneuroprotectiveeffectsofactiveLigustrazinehydrochlorideonSH-SY5YcellsinjuredbyH2O2ande

5、xploretheunderlyingmolecularmechanisms.Methods:1.EstablishmentofthemodelofoxidativedamageinSH-SY5YcellsinducedbyH2O2;2.UsingMTTassaytodeterminecellproliferation;3.UsingFCMtodetectinduced-apoptosis;4.BasedonWesternblotmethodtotesttheexpressionofMMP-9protein

6、;Conclusions:1.TheoptimalconcentrationforH2O2-induceddamageinSH-SY5Ycellsmodelis200μM,andtheoptimaltimeisfourhours.ThebestprotectiontimeforLigustrazinehydrochlorideistwohours.2.TheLigustrazinehydrochloridecouldbeusedtoprotectH2O2-induceddamageinSH-SY5Ycell

7、s,andtheeffectoftheprotectionispositivecorrelationwiththedoseused.3.ThisexperimentrevealedthattheprotectiveeffectsofligustrazinehydrochlorideagainstH2O2-induceddamagemaythroughthedown-regulationofMMP-9protein.KeyWords：Ligustrazinehydrochloride,oxidativestr

8、ess,MMP-9,SH-SY5YII目录第1章绪论………………………………………………………………………………….1第2章文献综述……………………………………………………………………………32.1MMP-9的生理特征.................................................................................................32