as2o3联合ddp对裸鼠乳腺癌移植瘤作用的研究

《as2o3联合ddp对裸鼠乳腺癌移植瘤作用的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、As2O3联合DDP对裸鼠乳腺癌移植瘤作用的研究【摘要】目的探讨三氧化二砷（As2O3）和顺铂（DDP）联合应用对人乳腺癌细胞系MCF-7裸鼠移植瘤生长的抑制作用并探讨其机制。方法建立MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤模型。随机分为4组：对照组、As2O3组、DDP组、As2O3+DDP组（联合组）。分别测量裸鼠体质量、瘤质量及瘤体积，透射电镜观察各组移植瘤组织的超微结构，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测肿瘤组织中SurvivinmRNA的表达。结果在瘤质量及瘤体积方面，联合组与As2O3组、DDP组

2、比较显著减小。电镜下联合组肿瘤细胞内可见典型的凋亡表现：核碎裂，染色质浓缩、边集。RT-PCR结果显示：联合组与As2O3组、DDP组比较SurvivinmRNA条带强度显著减小。结论As2O3与DDP联合应用对MCF-7裸鼠移植瘤生长有明显的抑制作用,其作用机制可能与下调Survivin有关。【关键词】三氧化二砷顺乳腺癌细胞移植瘤Abstract:ObjectiveTostudytheeffectofarsenictrioxide(As2O3)andcisplatin(DDP)onhumanbre

3、astcancercelllineMCF-7invivoanditspossiblemechanismofaction.MethodsMCF-7cellsice,andthetumor-bearingmiceorvolumeandmasse.Transmissionelectronmicroscopyadetostudythecellularultrastructureoftumor.RT-PCRormassandvolumeoremarkedlyinthebineddruggroupthanint

4、heothertatinarginatedandsegregatedinthebinationgroup,notintheothertRNAinthebinationgrouparkedlyloorgroicebearinghumanbreastcancercelllineMCF-7,ayberelatedtothedol注射于裸鼠右前肢腋下，观察肿瘤移植成功率。1.3实验分组实验动物为BALB/C遗传背景的裸鼠，购于北京协和医科大学实验动物中心。选用4～6周龄,体重18～20g的雌性裸鼠。24只裸

5、鼠饲养于恒温（22～25℃）、恒定湿度的SPF层流罩中，随机分为4组，每组6只。经高压灭菌的标准饲料和水供动物自由饮食。接种MCF-7细胞后第15天开始用药，此时移植瘤大小约75mm3，各组之间无显著差异。每次用药前称裸鼠体质量。用药情况如下：①对照组：生理盐水，0.2ml/次，隔日腹腔注射1次，共8次。②As2O3组：As2O33.0mg/kg，0.2ml/次，隔日腹腔注射1次，共8次。③DDP组：DDP3.0mg/kg，0.2ml/次，每周腹腔注射2次，共4次。④As2O3+DDP组（联合组）：

6、As2O31.5mg/kg，0.2ml/次，隔日腹腔注射1次，共8次；DDP1.5mg/kg，0.2ml/次，每周腹腔注射2次，共4次。1.4皮下肿瘤生长治疗实验用药前测量移植瘤体积，实验结束时测量移植瘤质量及体积。同时于用药前及治疗结束时称裸鼠体质量（裸鼠质量=带瘤鼠质量－瘤质量）。按公式［2］计算移植瘤体积(T)：T=πAB2/6（π：圆周率，A：最长径，B：最短径）。按公式［3］计算抑瘤率及q值：抑瘤率=（1－治疗组平均瘤质量/对照组平均瘤质量）×100%；q值=联合组抑瘤率/［As2O3组抑

7、瘤率+DDP组抑瘤率×（1－As2O3组抑瘤率）］。根据q值判断联合用药的疗效，若<0.85为拮抗，若0.85～1.15为相加，若>1.15为协同。1.5透射电镜观察从剥离的瘤体上取下小块组织用眼科剪剪成2mm×2mm,戊二醛前固定，锇酸后固定2h,常规脱水包埋切片,铅铀染色透射电镜观察,拍照。1.6RT-PCR测定SurvivinmRNA的表达按常规方法进行组织总RNA的提取、cDNA的合成。PCR反应：反应总体积为20μl，包括4μlcDNA，25mmol/LMgCl21.5μl，0

8、.5UTaq酶1μl，10μmol/L引物各0.7μl，10mmol/LdNTP0.4μl，10×buffer0.8μl，用超纯水补足到20μl。PCR反应条件为：94℃预变性5min，94℃30s，56℃退火30s，72℃延伸45s，30个循环，72℃复性5min。引物由北京奥科生物技术公司设计合成。Survivin引物序列上游：5′-TCTCAAGGACCACCGCATCT-3′；下游:5′-GACAGAAAGGAAAGCGCAACC-3′（229bp）；β-ac