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《预处理对在体大鼠冠脉血管内皮细胞的保护及机制探讨》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、预处理对在体大鼠冠脉血管内皮细胞的保护及机制探讨作者：谭志胜杨海捷陈代陆【摘要】目的探讨缺血预处理(IPC)对缺血再灌注(I/R)所致的血管内皮细胞(VEC)损伤是否有保护作用及蛋白激酶C(PKC)在其中的作用。方法实验大鼠分为5组：对照组、缺血再灌注组(I/R组)、预处理组(IPC组)、多黏菌素B(PKC抑制剂)+I/R组、多黏菌素B+IPC组。测定各组一氧化氮(NO)、内皮素(ET)、循环内皮细胞(CEC)、丙二醛(MDA)，并作冠脉VEC透射电镜观察。结果I/R后血浆中NO明显减少，ET明显升高,NO/ET值明显降低，CEC明显增多，MDA明显升高(P<0.05或P
2、<0.01)。IPC能逆转上述改变,使血浆中NO增多,ET降低,NO/ET值恢复,CEC数量减少,MDA含量降低(P<0.05或P<0.01)。PKC的抑制剂多黏菌素B并不加重I/R的上述改变,但是能阻断IPC的作用。电镜显示：I/R后VEC的超微结构严重损伤，IPC能明显减轻VEC的结构损伤。结论I/R导致VEC结构和功能的严重损伤，IPC能减轻I/R后VEC的结构和功能损伤，PKC可能参与了这一过程。【关键词】缺血再灌注损伤;缺血预处理;血管内皮细胞;蛋白缺血预处理(IPC)是指一次或多次短暂缺血再灌注(I/R)对随后较长时间的I/R心肌有保护作用，能减少
3、I/R后心肌梗死面积，减轻再灌注心律失常的发生率和严重程度，恢复心室收缩功能。IPC作为一种内源性的强有力的心肌保护途径，近年得到迅猛的发展，成为心脏领域的研究热点。心脏I/R时不仅心肌细胞受损，血管内皮细胞(VEC)的结构和功能亦受到严重损伤，甚至受损时间更早于心肌细胞〔1〕。目前IPC主要集中于心脏，对血管内皮的研究较少，本实验通过活体大鼠心脏研究，以探讨IPC能否减轻I/R后VEC的损伤、保护VEC，并探讨了蛋白激酶C(PKC)在其中的作用。 1材料与方法 1.1实验动物健康成年雄性DA)测定取心肌组织400mg，加入4ml磷酸盐缓冲液，制成10%的心肌匀浆，而后按改
4、良硫代巴比妥酸法(TBA法)测定。 1.4.5VEC超微结构观察在体再灌结束后，迅速取出心脏置于盛有氧饱和的KH灌流液中，用灌流液经主动脉逆行冲洗冠脉，然后取结扎远端含LAD的左室心肌小块，置于2.5%戊二醛固定液中在4℃固定过夜(24h),继用1%锇酸后固定2h,作常规电镜切片,在日立透射电镜下观察冠脉VEC的超微结构。 1.5统计学处理所测数据用x±s表示,采用SPSS11.0程序软件包中的单因素方差分析,t检验。 2结果 2.1各组血浆中NO、ET含量及NO/ET值比较由表1可见，I/R使VEC释放NO减少,ET增多,破坏二者之间的平衡,而IPC能使这种平衡趋于
5、恢复。多黏菌素B不影响I/R后NO、ET的水平变化,但使IPC恢复NO/ET平衡的作用破坏,使NO减少,ET增加。提示I/R时VEC分泌NO、ET功能失调，而IPC能恢复VEC这种分泌功能,使NO产生增多，PKC可能参与了这一作用。表1各组血浆中NO、ET含量及NO/ET值的比较与对照组相比：1)P<0.05,2)P<0.01;与I/R组相比：3)P<0.05，4)P<0.01;与IPC组相比：5)P<0.05,6)P<0.01，下表同 2.2各组CEC的数量和MDA含量变化见表2，CEC形态多样,大多数为极不规则的多边形,呈皱缩、扭曲或折
6、叠状。对照组CEC数量较少，I/R时血中CEC明显增多(P<0.01)，IPC能明显降低I/R所致的CEC增加(P<0.05)，PKC的抑制剂多黏菌素B并不增加I/R后CEC数量,但阻断了IPC的保护作用,使CEC明显上升。I/R时MDA明显上升(P<0.01)，而IPC时MDA明显下降(P<0.01)。多黏菌素B阻断IPC降低MDA的作用,使MDA明显上升(P<0.05)。表2各组CEC的数量和MDA含量的比较 2.3VEC超微结构的变化对照组，细胞形态完整,胞膜清晰,核区胞浆突入管腔，大部分胞浆延伸变薄，胞浆线粒体少而小,不含钙粒,有丰富的质
7、膜小泡。I/R组，有的内皮细胞肿胀,有的内皮细胞皱缩变小，呈坏死状,质膜小泡消失,线粒体肿胀,并有空泡形成,胞浆中出现大的空泡,细胞间连接模糊。IPC组，VEC稍肿胀,形态完整,胞核胞质正常,有质膜小泡存在,线粒体不肿胀,无空泡形成,细胞间连接紧密清晰。提示I/R使VEC超微结构严重损伤，加速VEC的坏死，而IPC能保护VEC的超微结构，减轻I/R对VEC的结构损伤。 3讨论 正常血管内皮可分泌一系列重要的血管活性物质。NO是血管内皮释放的重要舒血管物质，集中代表了正常血管内皮的功能，而
