notch1基因在人脑胶质瘤中的表达及其意义

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1、Notch1基因在人脑胶质瘤中的表达及其意义:易海波石松生杨卫忠陈春美【摘要】  目的研究Notch1在人脑胶质瘤中的表达,并对其表达与胶质瘤病理级别的关系进行研究,探讨Notch1对人脑胶质瘤发生、发展所起的作用,从而为胶质瘤的治疗提供一定的理论依据。方法应用半定量RTPCR方法检测70例人脑胶质瘤标本和12例正常脑组织中的Notch1mRNA的表达。结果Notch1mRNA在人脑胶质瘤和正常脑组织中均可表达,且在人脑胶质瘤中的表达显著高于正常脑组织(P<0.01);人脑胶质瘤Ⅰ~Ⅱ级组和Ⅲ~Ⅳ级组中Notch1mRNA表达均

2、显著高于正常脑组织(P<0.01),并且Notch1mRNA在人脑胶质瘤Ⅲ~Ⅳ级组中的表达显著高于Ⅰ~Ⅱ级组(P<0.01)。结论Notch1mRNA在人脑胶质瘤和正常脑组织中均表达,且在人脑胶质瘤中呈显著高表达,可能与人脑胶质瘤的发生、发展有关;Notch1的表达与人脑胶质瘤的病理分级相关。【关键词】Notch1 胶质瘤 RTPCR  TheExpressionandSignificanceofNotch1GeneinHumanGliomasKeya;RTPCR Notch信号通路是一个既简单又复杂的信号通路,且在多个物

3、种中表达。Notch信号对于细胞的生长发育具有广泛的多样化的影响,包括干细胞的维持;细胞分化、增殖和凋亡的决定。1991年,Notch1在人类T淋巴母细胞白血病中首先被鉴定出来,首次提示了Notch信号通路与肿瘤相关[1]。许多体外及动物实验中已证实,活化的Notch可使正常细胞向恶性转化。已有越来越多的证据表明异常的Notch信号与一些人类肿瘤的发生发展相关。本实验从基因水平,检测Notch1在各级别人脑胶质瘤和正常脑组织的表达情况。分析其与胶质瘤病理级别的相关性,探讨Notch1在人脑胶质瘤中的作用机制。1资料与方法1.1资料收集福建医科

4、大学附属协和医院神经外科2004年1月~2005年9月手术切除的人脑胶质瘤新鲜标本70例,男39例,女31例,年龄2~92岁,平均40.3岁。按2000年gCl24μl,10×Buffer2μl,dNTP2μl,RNasin0.5μl,Oligo(dT)15引物1μl,AMV反转录酶0.75μl,加ddH2O补足至20μl,将反应体系于42℃60min,95℃5min,4℃5min。1.3.3PCR反应体系cDNA2μl,dNTP0.9μl,MgCl23.75μl,10×PCRbuffer4.9μl,上下游引物(20pmol/μl)各1.25μl,

5、TaqDNA聚合酶0.25μl,加ddH20补至50μl,混匀,离心。反应条件:94℃预变性5min;变性94℃30s,退火58℃40s,延伸72℃40s,共35个循环,最后72℃延伸10min。1.3.4取PCR产物5μl,1.2%琼脂糖凝胶电泳(电压100V,时间25min)。将电泳凝胶置于凝胶图像分析系统(GelDoc2000)半定量分析。1.4统计学分析凝胶图像分析系统进行灰度分析,结果以±s表示,采用SPSS13.0统计学软件进行统计学分析。图1各组总RNA完整性鉴定2.2Notch1RTPCR产物电泳结果70例人脑胶质瘤和12例正常

6、脑组织均可见表达Notch1mRNA,其RTPCR产物电泳结果,见图2。M:marker;1:正常脑组织;2:Ⅰ级人脑胶质瘤;3:Ⅲ级人脑胶质瘤图2Notch1RTPCR产物电泳结果2.3四组实验病例的Notch1mRNA表达水平对照组和胶质瘤组行两样本t检验,得出P<0.01,表明人脑胶质瘤Notch1mRNA表达显著高于正常脑组织。再将对照组、胶质瘤Ⅰ~Ⅱ级组和胶质瘤Ⅲ~Ⅳ级组行单因子方差分析(OneannRS,MitsiadisE,etal.HumanligandsoftheNotchreceptor[J].AmJPath

7、ol,1999,154(3):785794.[3]ZagourasP,StifaniS,BlaumuellerCM,etal.AlterationsinNotchsignalinginneoplasticlesionsofthehumancervix[J].ProcNatlAcadSciUSA,1995,92(14):64146418.[4]MiyamotoY,MaitraA,GhoshB,etal.NotchmediatesTGFalphainducedchangesinepithelialdifferentiationduringpanc

8、reatictumorigenesis[J].CancerCell,2003,3(6):565576.[5],etal.

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