notch1基因在人脑胶质瘤中的表达及其意义论文

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1、Notch1基因在人脑胶质瘤中的表达及其意义论文易海波石松生杨卫忠陈春美【摘要】目的研究Notch1在人脑胶质瘤中的表达，并对其表达与胶质瘤病理级别的关系进行研究，探讨Notch1对人脑胶质瘤发生、发展所起的作用，从而为胶质瘤的治疗提供一定的理论依据。方法应用半定量RTPCR方法检测70例人脑胶质瘤标本和12例正常脑组织中的Notch1mRNA的表达。结果Notch1mRNA在人脑胶质瘤和正常脑组织中均可表达，且在人脑胶质瘤中的表达显著高于正常脑组织（P0.01）；人脑胶质瘤Ⅰ～Ⅱ级组和Ⅲ～Ⅳ级组中Notc

2、h1mRNA表达均显著高于正常脑组织（P0.01），并且Notch1mRNA在人脑胶质瘤Ⅲ～Ⅳ级组中的表达显著高于Ⅰ～Ⅱ级组（P0.01）。结论Notch1mRNA在人脑胶质瘤和正常脑组织中均表达，且在人脑胶质瘤中呈显著高表达，可能与人脑胶质瘤的发生、发展有关；Notch1的表达与人脑胶质瘤的病理分级相关。【关键词】Notch1胶质瘤RTPCRTheExpressionandSignificanceofNotch1GeneinHumanGliomasKeya;RTPCRNotch信号通路是一个既简单又复

3、杂的信号通路.freelega公司），TaqDNA聚合酶（上海普洛麦格公司）。Notch1引物序列为利用Primier5.0软件自行设计。Notch1：上游引物序列：5’CGTGCAGAGTGAGACCGTGGA3’下游引物序列：5’TGCGGTCTGTCTGGTTGTGCA3’扩增片断长度为599bp。βactin：上游引物序列：5’CGAGAAGATGACCCAGATCA3’下游引物序列：5’GATCTTCATGAGGTAGTCAG3’扩增片断长度为234bp。1.3方法1.3.1采用TRIz

4、ol法提取组织总RNA取少量组织总RNA，琼脂糖凝胶电泳测试RNA完整。1.3.2按RTPCRkit（二步法）说明书进行cDNA的合成取1μgRNA至于PCR管，70℃孵育10min后，稍离心放置冰上。加入MgCl24μl，10×Buffer2μl，dNTP2μl，RNasin0.5μl，Oligo(dT)15引物1μl，AMV反转录酶0.75μl，加ddH2O补足至20μl，将反应体系于42℃60min，95℃5min，4℃5min。1.3.3PCR反应体系cDNA2μl，dNTP0.9μl，MgCl23.75μl

5、，10×PCRbuffer4.9μl，上下游引物（20pmol/μl）各1.25μl，TaqDNA聚合酶0.25μl，加ddH20补至50μl，混匀，离心。反应条件：94℃预变性5min;变性94℃30s，退火58℃40s，延伸72℃40s，共35个循环，最后72℃延伸10min。1.3.4取PCR产物5μl，1.2%琼脂糖凝胶电泳（电压100V，时间25min）。将电泳凝胶置于凝胶图像分析系统（GelDoc2000）半定量分析。1.4统计学分析凝胶图像分析系统进行灰度分析，结果以±s表示，采用SPSS13.0统计学软

6、件进行统计学分析。2结果2.1总RNA完整性鉴定各组RNA均可见完整的18S和28S亚基，见图1。1：正常脑组织；2：Ⅰ级人脑胶质瘤；3：Ⅱ级人脑胶质瘤；4：Ⅲ级人脑胶质瘤；5：Ⅳ级人脑胶质瘤图1各组总RNA完整性鉴定2.2Notch1RTPCR产物电泳结果70例人脑胶质瘤和12例正常脑组织均可见表达Notch1mRNA，其RTPCR产物电泳结果，见图2。M：marker；1：正常脑组织；2：Ⅰ级人脑胶质瘤；3：Ⅲ级人脑胶质瘤图2Notch1RTPCR产物电泳结果2.3四组实验病例的Notch1mRNA表

7、达水平对照组和胶质瘤组行两样本t检验，得出P0.01，表明人脑胶质瘤Notch1mRNA表达显著高于正常脑组织。再将对照组、胶质瘤Ⅰ～Ⅱ级组和胶质瘤Ⅲ～Ⅳ级组行单因子方差分析（OneannRS,MitsiadisE,etal.HumanligandsoftheNotchreceptor［J］.AmJPathol,1999,154(3):785794.3ZagourasP,StifaniS,BlaumuellerCM,.freelancervixJ.ProcNatlAcadSciUSA,1995,92(14):64

8、146418.4MiyamotoY,MaitraA,GhoshB,etal.NotchmediatesTGFalphainducedchangesinepithelialdifferentiationduringpancreatictumorigenesisJ.CancerCell,2003,3(6):565576.5，et