notch1基因在人脑胶质瘤中的表达及其意义

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1、Notch1基因在人脑胶质瘤中的表达及其意义易海波石松生杨卫忠陈春美【摘要】　　目的研究Notch1在人脑胶质瘤中的表达，并对其表达与胶质瘤病理级别的关系进行研究，探讨Notch1对人脑胶质瘤发生、发展所起的作用，从而为胶质瘤的治疗提供一定的理论依据。方法应用半定量RTPCR方法检测70例人脑胶质瘤标本和12例正常脑组织中的Notch1mRNA的表达。结果Notch1mRNA在人脑胶质瘤和正常脑组织中均可表达，且在人脑胶质瘤中的表达显著高于正常脑组织（P0.01）；人脑胶质瘤Ⅰ～Ⅱ级组和Ⅲ～Ⅳ级组中Notch1mRNA表达

2、均显著高于正常脑组织（P0.01），并且Notch1mRNA在人脑胶质瘤Ⅲ～Ⅳ级组中的表达显著高于Ⅰ～Ⅱ级组（P0.01）。结论Notch1mRNA在人脑胶质瘤和正常脑组织中均表达，且在人脑胶质瘤中呈显著高表达，可能与人脑胶质瘤的发生、发展有关；Notch1的表达与人脑胶质瘤的病理分级相关。【关键词】Notch1　胶质瘤　RTPCR　　TheExpressionandSignificanceofNotch1GeneinHumanGliomasKeya;RTPCR　Notch信号通路是一个既简单又复杂的信号通路，且在多个物种

3、中表达。Notch信号对于细胞的生长发育具有广泛的多样化的影响，包括干细胞的维持；细胞分化、增殖和凋亡的决定。1991年，Notch1在人类T淋巴母细胞白血病中首先被鉴定出来，首次提示了Notch信号通路与肿瘤相关[1]。许多体外及动物实验中已证实，活化的Notch可使正常细胞向恶性转化。已有越来越多的证据表明异常的Notch信号与一些人类肿瘤的发生发展相关。本实验从基因水平，检测Notch1在各级别人脑胶质瘤和正常脑组织的表达情况。分析其与胶质瘤病理级别的相关性，探讨Notch1在人脑胶质瘤中的作用机制。1资料与方法1.1资料来

4、源收集福建医科大学附属协和医院神经外科2004年1月～2005年9月手术切除的人脑胶质瘤新鲜标本70例，男39例，女31例，年龄2～92岁，平均40.3岁。按2000年gCl24μl，10×Buffer2μl，dNTP2μl，RNasin0.5μl，Oligo(dT)15引物1μl，AMV反转录酶0.75μl，加ddH2O补足至20μl，将反应体系于42℃60min，95℃5min，4℃5min。1.3.3PCR反应体系cDNA2μl，dNTP0.9μl，MgCl23.75μl，10×PCRbuffer4.9μl，上下游引物（20pmo

5、l/μl）各1.25μl，TaqDNA聚合酶0.25μl，加ddH20补至50μl，混匀，离心。反应条件：94℃预变性5min;变性94℃30s，退火58℃40s，延伸72℃40s，共35个循环，最后72℃延伸10min。1.3.4取PCR产物5μl，1.2%琼脂糖凝胶电泳（电压100V，时间25min）。将电泳凝胶置于凝胶图像分析系统（GelDoc2000）半定量分析。1.4统计学分析凝胶图像分析系统进行灰度分析，结果以±s表示，采用SPSS13.0统计学软件进行统计学分析。2结果2.1总RNA完整性鉴定各组RNA均可见完整的18S和

6、28S亚基，见图1。1：正常脑组织；2：Ⅰ级人脑胶质瘤；3：Ⅱ级人脑胶质瘤；4：Ⅲ级人脑胶质瘤；5：Ⅳ级人脑胶质瘤图1各组总RNA完整性鉴定2.2Notch1RTPCR产物电泳结果70例人脑胶质瘤和12例正常脑组织均可见表达Notch1mRNA，其RTPCR产物电泳结果，见图2。M：marker；1：正常脑组织；2：Ⅰ级人脑胶质瘤；3：Ⅲ级人脑胶质瘤图2Notch1RTPCR产物电泳结果2.3四组实验病例的Notch1mRNA表达水平对照组和胶质瘤组行两样本t检验，得出P0.01，表明人脑胶质瘤Notch1mRNA表达显

7、著高于正常脑组织。再将对照组、胶质瘤Ⅰ～Ⅱ级组和胶质瘤Ⅲ～Ⅳ级组行单因子方差分析（OneannRS,MitsiadisE,etal.HumanligandsoftheNotchreceptor〔J〕.AmJPathol,1999,154(3):785794.[3]ZagourasP,StifaniS,BlaumuellerCM,etal.AlterationsinNotchsignalinginneoplasticlesionsofthehumancervix[J].ProcNatlAcadSciUSA,1995,92(14):64

8、146418.[4]MiyamotoY,MaitraA,GhoshB,etal.NotchmediatesTGFalphainducedchangesinepithelialdifferentiatio