紫苏属植物叶片氨基酸组成及含量分析

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1、紫苏属植物叶片氨基酸组成及含量分析作者：蔡乾蓉　吴卫　郑有良　杨文婷　　摘要：采用HPLC法对来自美国、日本、四川和广东等地共27份紫苏属材料叶片氨基酸组成及含量进行测定。结果表明，该属植物叶片中含有17种氨基酸，各氨基酸含量在材料间有较大变异，脯氨酸的变异系数高达59.19%。来自四川的P06-7其必需氨基酸含量达19.55mg/g，氨基酸总量为57.65mg/g，综合表现优良。试验结果还表明，野生紫苏的药效氨基酸和香甜味氨基酸含量均相对较高，是紫苏属植物中氨基酸含量丰富的资源。　　关键词：紫苏；氨基酸；HPLC法　　　　1材料和方法　　　　1.1供试材料　　试验共

2、27份紫苏属植物材料，均由四川农业大学植物教研室杨光辉老师鉴定。本文将紫苏和白苏分开研究。其中紫苏种有7份材料：P06-4来自重庆南川，P06-11紫来自四川雅安，P06-16、P06-17紫来自四川芦山，P06-18来自四川崇州，P07-1来自四川遂宁，P06-31来自日本；野生紫苏种有材料6份：P06-6来自四川都江堰，P06-7、P06-9、P06-10来自四川雅安，P06-12紫来自四川资中，P06-15紫来自四川简阳；回回苏变种有材料5份：P06-1回来自广东中山，P06-13来自四川内江，P06-20A、P06-20B、P06-20C来自四川成都；白苏种有材料有9

3、份：P06-11白来自四川雅安，P06-15白来自四川简阳，P06-17白来自四川芦山，P06-30、P06-36来自美国，P06-32来自泰国，P06-33来自韩国，P06-37来自日本，P07-2来自四川广元。　　1.2仪器与试剂　　Agilent公司1100型高效液相色谱仪（含脱气机、四元梯度泵、自动进样器进样、柱温箱、DAD检测器），Sartorius公司BP211D型电子天平，ICE公司Micromax型离心机，Millipope公司MilliQ型纯水仪，Labarey公司微量移液器AutosEienee公司溶剂过滤器，上海精科雷磁公司PHS一2C型酸度计。乙腈

4、、甲醇、四氢呋喃均为色谱纯，由TEDIA公司提供，内标物SAR和17种氨基酸混合标样（含AspGluSerHisGlyThrAlaArgCys-SS-CysTyr、Val、Met、Phe、Ile、Leu、Lys、Pro）以及衍生剂OPA和FMOC均由Agilent公司提供，其余试剂为分析纯。　　1.3方法　　1.3.1供试样品的制备　　采取3个月生植株上的完整健全叶片，在80℃干燥箱中烘干，粉碎，准确称取0.5g于10mL安瓿瓶中，加入6mol/L的HCl7mL，充入高纯N2，将安瓿瓶封口，置于105℃恒温干燥箱中消化过夜。冷却后过滤，滤液浓缩近干，加5mL0.1mol

5、/L的HCl溶解，取1.5ml至1.5ml离心管中，10000转/min离心10min，取上清液900ul加入100ul5nmol/ul内标物SAR，混匀后作为供试样品。　　1.3.2标准溶液的制备　　5nmol/L内标液制备：精密称取SAR22.3mg以0.1mol/LHC1定容至50mL。　　500pmol/L内标液制备：精密吸取5nmol/L内标液5mL以0.1mol/LHC1定容至50mL。　　900pmol/L氨基酸混合标液制备：精密吸取900ul1000pmol/L氨基酸混合标液加入5nmol/L内标液100ul；　　225pmol/L氨基酸混合标液制备

6、：精密吸取900ul250pmol/L氨基酸混合标液加入5nmol/L内标液100ul；　　90pmol/L氨基酸混合标液制备：精密吸取900ul100pmol/L氨基酸混合标液加入5nmol/L内标液100ul。　　1.3.3色谱条件　　样品自动柱前衍生化程序：吸取硼酸缓冲液5ul，再吸取OPA试剂1ul，洗针1次，吸取样品1ul，原位混合6次。吸取FMOC试剂1ul，洗针1次，原位混合3次，进样。　　色谱柱：HypersilAA-ODSC182．1×200mm　　流动相A：醋酸钠1.36±0.025g，加入纯水500mL溶解，加EDTA溶液50ul，再加三乙胺9

7、0ul，用1％-2％醋酸调pH=7.20±0.05，再加入四氢呋喃1.5mL，混合均匀。　　流动相B：醋酸钠1.36±0.025g，加入纯水100mL溶解，用1％一2％醋酸调pH=7.20±0.05，将此溶液加至乙腈200mL和甲醇200mL的混合物中，并混合均匀。　　柱温：40℃紫外检测波长：338nm；　　梯度洗脱：流动相A：以0.45ml/min在0-17min由100%减至40%，17min-18min由40%减少至0；流动相B：以0.45ml/min在0-17min由0增至60%，17m