雪旺细胞构建人工神经在大鼠长段 神经缺损中的修复作用研究

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1、雪旺细胞构建人工神经在大鼠长段神经缺损中的修复作用研究【摘要】研究雪旺细胞与PLGA构成的组织工程化人工神经修复大鼠周围神经缺损的效果。［方法］将雪旺细胞接种在内置polyglactin910纤维的PLGA中空管，构建成组织工程人工神经。将60只SD大鼠随机分3组，每组20只，建立大鼠坐骨神经缺损20mm的动物模型。A组用切下的自体神经段原位缝合，B组使用雪旺细胞组织工程人工神经进行修复，C组用未接种雪旺细胞的PLGA中空管进行修复。术后8、12周使用神经电生理和组织学观察分别进行效果评价。［结果］在大体观察、组织学观察中，B组的恢复表现与A组相近。在神经电生理检测、小腿三

2、头肌肌肉重量测定、桥接物横切面神经纤维数量测定的结果分析中B组略低于A组但明显高于C组。B组大鼠桥接段远端辣根过氧化酶示踪后在脊髓前角可以看到被标记的神经元。透射电镜可见B组桥接物中段大量的再生神经纤维。［结论］用雪旺细胞和PLGA构建组织工程人工神经修复大鼠外周神经缺损，可以修复20mm的长段周围神经缺损，并可获得接近于大鼠自体神经修复的效果。【关键词】人工神经长段缺损神经修复Abstract：［Objective］TostudytheeffectofrepairingofratperipheralnervedefectanSchlyinesilartogroupAing

3、eneralandhistologicalstudy,houscleberofregenerationnervefiberscouldbeseenfromelectronmicroscope.［Conclusion］Thetissueengineeringartificialnerveposedmdefectsofperipheralnerve,andithasanapproximatetreatmenteffecttotheself-nervegrafting.Keya公司)；20％胎牛血清DMEM(Gibaco公司)；鼠尾胶(自制)；0.1g／mL盐酸氯胺酮注射液；20

4、～40mg／mL辣根过氧化酶液；DAB-H2O2作用液；3,3′-二甲基联苯胺(DAB)5mg，0.05mol/LTris-HCL缓冲液(pH值7.6)10mL，H2O2(30％)1μl。引产3～4个月婴儿死胎6个；3个月龄SD大鼠32只，体重200～250g；SXP-1B手术显微镜；LEIca冰冻切片机；LeicaDMIRB图像分析仪。1.2组织工程人工神经的制备1.2.1取胎儿外周神经，仔细剥离神经外膜，剪成0.5～1mm3小块，置于3.5cm培养皿中，使用反复植块法和差速贴壁法获得纯度较高的雪旺细胞悬液，细胞数量约在5×104。1.2.2将鼠尾胶包埋polyglact

5、in910纤维(直径12μm，长度2cm)，置入培养皿中，每10～12根纤维中心相互重叠呈放射状排列。使用直接植块法将人胚雪旺细胞接种于polyglactin910纤维上。20％胎牛血清DMEM，37℃、5％CO2培养，备用。1.2.3将20mm长度的PLGA导管预涂鼠尾胶后加入雪旺细胞悬液。37℃、5％CO2培养2周后，移入polyglactin910纤维，构建成人工神经导管，继续培养2d，准备植入。1.3动物实验将60只SD大鼠随机分3组，每组20只。A组用自体神经段原位缝合；B组用组织工程人工神经修复；C组用无雪旺细胞的PLGA中空管。腹腔注射氯胺酮200mg／kg麻

6、醉大鼠，常规消毒铺洞巾后作股后侧切口，暴露坐骨神经，显微尺测量下切除坐骨神经18mm，自然回缩后造成20mm的神经缺损。远侧断端距腓肠肌边缘约5mm，用10°的带针缝线在10倍手术显微镜下，将桥接物与两侧神经断端的外膜缝合。关闭伤口，按实验动物标准饲养12周。术后第8周各组随机取10只大鼠进行观察，第12周对各组剩下10只大鼠进行观察。1.4统计分析采用SPSS12.0软件对实验中各组数据进行分析，P<0.05时认为差异有显著性。2结果2.1一般观察术后观察伤口愈合情况、大鼠的精神状态、步态以及足部溃疡情况等。术后1周伤口基本愈合，各组大鼠均出现明显跛行。2周时各组大

7、鼠均出现患肢足跟溃疡。12周时，A、B组大鼠患肢足跟溃疡基本愈合，但患肢仍跛行；C组患肢足跟溃疡未愈合，患肢肌肉明显萎缩。2.2植入物观察第8、12周时，切开伤口进行观察。发现各组大鼠取材神经干呈乳白色连接远端神经，没有发现吻合口的断裂。A、B组再生神经直径较粗，神经近端未见神经瘤形成，表面可见清晰的血管，同周围组织均有黏连，但可以分离。B组PLGA管已基本降解。C组近端增粗，远段略塌陷，与周围肌肉组织轻度黏连，PLGA导管几乎完全降解吸收，神经没有长入远端。2.3神经电生理检测采用EsaoteBiomedicaP