新型组织工程神经导管的构建及其对大鼠坐骨神经缺损修复的实验研究

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1、分类号级密ＵＤＣ编号＊似讀似／爹硕壬学位论文新型组织工程神经导管的构建及其对大鼠坐骨神经缺损修复的实验研究Ｆａｂｒｉｃａｔｅｎｏｖｅｌａｒｔｉｆｉｃｉａｌｎｅｒｖｅｃｏｎｄｕｉｔｓｆｏｒｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｔｈｅｇｓｃｉａｔｉｃｎｅｒｖｅｄｅｆｅｃｔｓ王祥海导师姓名郭家松教授专业名務人体解剖与巧织胚胎学培养类型全日制论文提交日期２０巧年４月南方医科大学２０１２级硕±学位论文新型组织工程神经导管的构建及其对大鼠

2、坐骨神经缺损修复的实验研究Ｆａｂｒｉｃａｔｅｎｏｖｅｌａｒｔｉｆｉｃｉａｌｎｅｒｖｅｃｏｎｄｕｉｔｓｆｏｒｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇｔｈｅｓｃｉａｔｉｃｎｅｒｖｅｄｅｆｅｃｔｓ课题来源：国家自然科学基金巧１３７１３５４）国家重点基础研究计划（９７３计划，２０１４ＣＢ５４２２０２）广州市科技计划应用基础重点项目ｙ２Ｃ３２１２１６０９）广东省高层次人才引进专项（２０５０２０＾学位申请人王祥海导师姓違郭家松教授专业為称人体解剖与组织化胎学培养类型全日制培养

3、层次硕去所在学院基础医学院答辩委员会主席曾园山教授答辩委员会委员黄文华教授马宁芳教授白晚春教授张琳教授２０１５年５月２０日广州硕壬学位论文新型组织工程神经导管的构建及其对大鼠坐骨神经缺损修复的实验研究硕±研究生：王样海指导教师：郭家松教授摘要．８％周围神经损伤在临床工作中比较常见，在外伤患者中，约有２的病例伴有不同程度的周围神经损伤。对于短距离的神经损伤，可Ｕｉ通过断端直接吻合一的方法来修复，但是对于长距离的神经缺损，则必须给予个适宜生长的环境才能引

4、导神经纤维的延伸。目前对于长距离的神经缺损通常采用移植物桥接的一方式，，常用的移植物主要有神经静脉或者动脉等等。但是，这些方法都有些不可避免的缺点，，比如移植材料来源的短缺额外的创伤Ｗ及供区的功能障。碍另外供体移植物的大小也不能很好的适应待修复的神经，异体移植的免疫排斥反应等等。而最近兴起的组织工程神经被认为是有希望的替代方案，应用，能够很好的解决上巧的问题组织工程的方法构建神经移植物。对于理想的組织工程神经，要求其具有良好的生物相容性，生物降解性，并且能够引导和促进损伤神经的再生。在本文中我们

5、先后构建了Ｈ种人工神经应用于周围神经损伤的修复。分别为ＰＬＧＡ复合自聚合肤纳米材料，ＰＬＧＡ复合自聚合巧纳米材料及施万细胞和ＰＬＧＡ复合有序胶原蛋白支架构建的人工神经。施万细胞巧ｃｈｗａｎｎｃｅｌｌｓ，ＳＣｓ）是周围神经的主要结构和功能细胞，它能分泌各种神经营养因子，产生细胞外基质和细胞巧附因子，并且与多种生物材料具有良好的相容性。Ｉｍ在我们用到的材料中自聚合肤鈍米材料ｓｅｌｆａｓｓｅｍｂｌｉｎｅｔｉｄｅ（ｇｐｐｎａｎｏｆｌｂｅｒｓｃａｆｆｏｌｄ，ＳＡＰＮＳ）是最近兴起的生

6、物材料，已经广泛应用于组织工程中。与传统材料相比，其纤维构成和扎径能够更好的模拟细胞外基质，有利－－－于细胞的生长。ＰＬＧＡ全称是聚乳酸哲基艺酸共聚物（ｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｃｃ〇ｇｌｙｃｏｌｉｃａｃｉｄ）），具有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜性，被广泛应用于工业领。ＰＬＧＡ通过Ａ制药、医用工程材料和现代化域在美国，了阳的认证，作为药巧辅料收录进美国药典。胶原蛋白是细胞外间质的重要组成部分，它的分布遍及全身各个组织器官。胶原蛋白有着诸多的优点，在生物居学中的应用甚、为广泛且发展近速，包括作为

7、药物传递系统，外科缝线止血剂等，在组织工程中更是一个很重要的研究材料。通过上材料的互相结合，我们构建了Ｈ种組织工程神经，并检测了其对神经损伤再生的促进作用。材料和方法１．人工神经导管的制备Ｉ．１ＰＬＧＡ管的制备：将ＰＬＧＡ颗粒溶于Ｈ氯甲院中揽拌２４ｈ至均匀，制成５％的ＰＬＧＡ溶液，其中ＰＬＡ：ＰＧＡ为８５：１５。将相同于溶液中溶质质量的氯化钢－巧ｕｍ颗粒（９６）加入到溶液中揽拌２仙后将已经配制好的溶液浆料迅速倒入２ｈ聚四氣乙婦模具中成型为管状体并置于冷冻干燥机中巧干，将成型的导管用蒸

8、饱水洗６次去除材料中的氯化钢颗粒，然后再巧ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养液中冲洗３次，备用。１．２施万细胞的培养与鉴定：取两周龄大鼠，截取坐骨神经，用反复植块法培养纯化施万细胞。１．３胶原蛋白有序支架材料的制备：提取大鼠鼠尾胶原，通过冷冻干燥和物理拉伸制备内部含有有