小鼠室旁核内雌激素受体与催产素、加压素表达的免疫组化研究

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1、小鼠室旁核内雌激素受体与催产素、加压素表达的免疫组化研究作者：赵承军，邓其跃，张东梅，蔡文琴，阮怀珍，张吉强【摘要】目的研究雌激素的核受体ERα和ERβ以及催产素、加压素在成年雌性小鼠下丘脑室旁核内的表达。方法采用硫酸镍铵增强显色的免疫组化SP法检测ERα、ERβ、催产素和加压素在室旁核内的表达。结果雌激素的两种核受体在室旁核内都有表达，但是以ERβ为主（P＜0.001），其免疫阳性产物均在细胞核内，未见核外免疫阳性反应。催产素的免疫阳性产物主要在细胞核周围的胞浆即核周质内，而加压素的免疫阳性物质除了

2、在核周质内有很强的反应外，在突起内也可见很强的免疫反应。ERα的免疫阳性胞体主要在大细胞部内侧，而ERβ、催产素和加压素的免疫阳性胞体主要在背侧帽部或大细胞部的外侧。结论室旁核内两种雌激素受体可能都参与了对催产素和加压素的调节，但ERβ可能发挥了主要的调节作用。【关键词】雌激素受体；催产素；加压素；室旁核；小鼠Abstract:ObjectiveTostudytheexpressionsofthetice.MethodsTheexpressionsofERα,ERβ,oxytocinandvasopr

3、essinmoniumsulfateintensifiedimmunohistochemicalSPmethod.ResultsBothofthetmunoreactivitiesergavelessintensity,manypositivevaricositiesforvasopressinagnocellularpart,andothersagnocellularpartordorsalcupofthePVN.ConclusionBothERsmightinvolvetheacmodationofPVN,

4、butERβmightbethepredominantERinmediatingthisERdependantregulation.Keyicparaventricularnucleus;mouse已有的研究表明雌激素可以调节下丘脑室旁核的神经内分泌活动尤其是催产素（oxytocin，OT）和加压素（vasopressin，VP）的分泌，但是其机制尚不清楚［12］。我们此前研究了雌激素β受体（estrogenreceptorβ，ERβ）在小鼠室旁核（paraventricularnucleus，PVN

5、）内的发育学表达，以及在妊娠、哺乳鼠PVN的表达［34］，本文拟对PVN内两种雌激素受体ERα和ERβ，以及OT和VP的表达进行初步研究，以期为阐明雌激素受体介导的雌激素调节室旁核神经内分泌活动的机制提供新的资料。1材料与方法1.1主要试剂兔抗ERα、兔抗VP和鼠抗OT购自Chemicon公司；兔抗ERβ购自Zymed公司。生物素标记的羊抗兔或马抗小鼠以链霉卵白素标记的辣根过氧化物酶复合体（SPHRP）均购自北京中杉生物技术公司。其它试剂如硫酸镍铵为分析纯。1.2实验动物及标本制备正常成年昆明雌性小

6、鼠（体重25～28g）由第三军医大学实验动物中心提供。经阴道涂片鉴定为动情间期者共选取5只。动物用5%水合氯醛腹腔麻醉，开胸，经左心室插管到主动脉，剪开右心耳，先后灌注生理盐水200mL和4%多聚甲醛溶液300mL。灌注后取出大脑组织，分离下丘脑，放入4%多聚甲醛溶液继续后固定过夜。LEIca1860型冰冻切片机行冰冻切片，片厚30μm，切片漂于PBS中备用。1.3免疫组化染色硫酸镍铵增强显色的免疫组化技术按3讨论雌激素对神经系统的结构与功能具有重要的调节作用［12］，而其受体ERα和ERβ在脑内可能介导

7、了不同的生物学功能，这与其分布密切相关［68］。比如ERα在与生殖有关的核团如终纹床核、下丘脑腹内侧核和弓状核等部位表达较高，提示该受体可能主要参与了对生殖功能的调节。而ERβ在大脑皮质、基底前脑、海马等部位表达较高，提示ERβ可能主要参与了对学习记忆等高级功能的调节。有研究已证明敲除ERβ基因后，基于海马的学习记忆行为和LTP下降［9］，足以表明ERβ在脑内的重要作用。下丘脑含有两大神经内分泌系统，即位居室旁核、视上核的大细胞神经内分泌系统（主要分泌OT和VP），以及散在于下丘脑底部和其它核团的小

8、细胞神经内分泌系统（主要分泌各种促垂体激素）。因此，室旁核是重要的神经内分泌核团，主要由靠近第三脑室的小细胞部、外侧的大细胞部和位居其上的背侧帽部构成。OT是室旁核内的重要激素之一，对分娩起着关键的作用，还参与了学习记忆等重要的生理功能［1012］，有研究报道哺乳母鼠的学习记忆明显优于未育小鼠，实验证明这与OT密切相关。VP是PVN内的另一重要神经内分泌激素，除了主要与利尿有关以外，