兔儿伞不同溶剂提取物的体外抗氧化作用研究

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1、兔儿伞不同溶剂提取物的体外抗氧化作用研究作者：李加林，刘丽华，吴素珍，范启兰，陈水亲【摘要】目的探讨兔儿伞乙醇、丙酮、醋酸乙酯、水提取物体外抗氧化能力。方法利用微波辅助提取法分别得到了兔儿伞乙醇提取物、丙酮提取物、醋酸乙酯提取物和水提取物，采用Fonton反应体系产生羟基自由基和邻苯三酚自氧化产生超氧阴离子自由基。结果4种提取物对羟自由基、超氧阴离子自由基(O2-·)均有清除作用，其中以乙醇提取物的效果最佳。结论兔儿伞可作为抗氧化物质资源，有一定的开发利用价值。【关键词】兔儿伞；自由基；抗氧化活性自由基(freeradical)也称活性氧，很多情

2、况下，它都缺少一个电子，处于不稳定的状态。不稳定的自由基会从周围的物质中夺取电子配对，这种行为就是自由基的氧化作用。被夺走电子的物质，又去抢夺其它物质的电子。就这样，争夺电子的连锁反应逐渐扩散到各处，细胞一个一个被氧化，从而失去了其正常功能。越来越多的科学研究证实自由基是人体疾病和衰老的直接制造者。人只要活着，自由基就在不断生成。自由基一旦大量产生，超过身体内酶所能处理的程度，人的健康就会亮起红灯，出现癌症、动脉硬化、糖尿病、白内障、风湿性关节炎、巴金森氏症等多种疾病［1］。动物实验也指出，寿命的长短与自由基的产生及人体内抗氧化剂的浓度确实有密切

3、的关联；流行病学与临床研究报告也显示，如果人体内有足够的抗氧化剂，则可降低多种疾病的罹患几率。然而研究发现，合成抗氧化剂对人体具有潜在的威胁，如BHA可造成大鼠前胃增生、乳状瘤甚至癌变，在日本已被禁用;BHT能使人的axim.为菊科兔儿伞属多年生草本植物［5］，含有黄酮、维生素、多糖等多种保健活性成分和营养成分，其嫩叶和幼苗在我国民间许多地方都作为一种药食两用食品，很受欢迎［6］。研究表明兔儿伞中黄酮类化合物及生物碱含量较高［7，8］，现代药理学对其抗炎镇痛作用进行了探讨［9］，而对兔儿伞进行自由基清除的抗氧化研究未见报道，本文首次对兔儿伞提取物

4、（水提取物、乙醇提取物、丙酮提取物和醋酸乙酯提取物）的抗氧化活性进行了探讨，以期为兔儿伞作为一种天然的抗氧化物得到推广和利用。　　1材料与仪器　　1.1材料　　兔儿伞由安徽师范大学张中信老师于2007-06采自安徽黄山，经安徽师范大学张小平教授鉴定为兔儿伞SynEIlesisaconitifolia(Bunge)Maxim.。　　1.2仪器与试剂　　in/次，合并提取液，减压浓缩，真空干燥备用。　　2.2羟自由基(·OH)的清除能力采用亚铁离子催化H2O2产生·OH(Fonton反应)的方法［10，11］。取0.75mol/L邻二氮菲溶液lml，

5、PBS液2ml和蒸馏水1ml，充分混匀后，加0.75mmol/L硫酸亚铁Iml，混匀，加0.01%的H2O2lml，37℃水浴60min，以PBS液调零，536nm处测定吸光度，其值记为AP；用lml蒸馏水代替lmlH2O2，以PBS调零，测得吸光度记为AB；用1ml试样代替1ml蒸馏水，以同浓度不加H2O2的加试样管调零，测得吸光度记为As。·OH清除率(d%)计算公式:d(%)=(As-AP)/(AB-Ap)×100%。　　2.3超氧阴离子自由基(O2-·)清除能力取0.05mol/LpH8.2的Tris一HCl缓冲液4.5mol于试管中，置

6、25℃水浴预热20min，加入供试样品0.1ml，2.5mmol/L邻苯三酚0.4ml，混匀后在25℃水浴反应4min加8mmol/L盐酸两滴终止反应，（299±1）nm处测定吸光度，空白组以0.1ml蒸馏水代替供试样品，并按下式计算清除率［12］。d%=(A空白-A样品)/A空白×100%。　　3结果　　3.1不同溶剂提取物对羟自由基的清除作用兔儿伞不同溶剂提取物对·OH的清除作用如图1所示。乙醇提取物对羟自由基清除率的回归方程是:Y=1.57679+13.62904X（R=0.99669），丙酮提取物对羟自由基清除率的回归方程是：Y=0.43

7、101+9.93553X（R=0.9998），水提取物对羟自由基清除率的回归方程是Y=0.007+5.0335X（R=0.99736），醋酸乙酯提取物对羟自由基清除率的回归方程是Y=6.729+5.6145X（R=0.9699），由回归方程可求出兔儿伞的乙醇、丙酮、水、醋酸乙酯提取物对·OH清除率为50%时的提取物浓度（IC50）分别为：3.55，4.99，9.93，7.70mg/ml。由此可见，4种溶剂提取物对羟自由基均有一定的清除作用，其中乙醇提取物对羟自由基的清除效果最好。　　3.2不同溶剂提取物对超氧阴离子自由基的清除作用兔儿伞不同溶剂提

8、取物对O2-·的清除作用如图2所示。乙醇提取物对超氧阴离子自由基的清除率回归方程是:Y=1.97204+14.42311X（R=0.99