树脂吸附法分离苦瓜皂苷的工艺研究

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1、树脂吸附法分离苦瓜皂苷的工艺研究【摘要】目的研究苦瓜总皂苷的纯化方法。方法苦瓜醇提的浓缩液，通过经处理的NKA大孔吸附树脂，用不同浓度的乙醇进行梯度洗脱，UV法跟踪检测。结果80%乙醇洗液中苦瓜总皂苷的含量最高，可达到36%。结论NKA大孔吸附树脂可有效地分离提取苦瓜总皂苷。【关键词】苦瓜皂苷提取大孔吸附树脂NKA树脂　　StudyonExtractionTechnologyofAponinsfromMomordicacharantiaL.byMacroporousAbsorptionResin　　Abstract：ObjectiveTost

2、udyontheextractionandpurificationmethodsoftotalSaponinsinMomordicacharantiaL..MethodsMomordicaCharantiaL.ethanolisolatedsolutionspassedthroughtreatedNKAmacroporousabsorptionresin,andadegradientelutionordicacharantiaL.saponins.　　KeyordicacharantiaL.;Saponins;Extraction;Macro

3、porousadsorptionresin;NKAresin　　苦瓜MomordicacharantiaL.属葫芦科苦瓜属，是人们生活中的一种常用蔬菜，同时也是功能食品原料。国内外不少学者从不同地区、不同品种苦瓜及其种子中分离出了多种生理活性物质，其中苦瓜中含有的苦瓜皂苷、生物碱、植物甾醇等成分具有显著的降糖作用［1～4］。鉴于苦瓜皂苷的功效及药用价值，本文以苦瓜为原料，采用吸附法提取苦瓜皂苷，确定了各项主要技术参数，以期对苦瓜皂苷提取的工业化生产提供科学依据。　　1材料与方法　　1.1仪器与试　　剂山苦瓜，江都苦瓜种植基地；苦瓜皂苷对照品m

4、omordicosideA，实验室自制；大孔吸附树脂，商品号NKA、AB8和D101树脂，南开大学化工厂；LD52A离心机，北京医用离心机厂；玻璃层析柱：20mm×600mm；旋转蒸发器，上海精科实业有限公司；Cary紫外可见分光系统，美国VARIAN公司；薄层层析板G，青岛海洋化工厂分厂；玻璃点样毛细管，华西医科大学仪器厂；浓硫酸、冰醋酸和高氯酸等均为分析纯。　　1.2分析方法　　1.2.1苦瓜皂苷的含量测定［5］测定波长的选择：吸取MomordicosideA甲醇标准液（1.274mg/ml）80μl,自然挥干溶剂，加5%草醛冰醋酸

5、溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀、密塞，于60℃水浴加热15min，冰浴冷却，加冰醋酸5.0ml，用紫外可见分光系统测定吸收曲线［6］。选用545nm为测定波长。　　建立回归方程：分别吸取40，80，120，160，200μl甲醇标准液置10ml具塞试管中，同上法测定吸收度。皂苷含量和吸收值经回归处理，回归方程为：A=0.0058C0.1125，r=0.9994，(n=5)。苦瓜皂苷含量在40～200mg线性较好。样品溶液制备：洗脱液减压回收乙醇至干，用少量甲醇溶解后，3000r/min离心后移置10ml容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀备

6、用。样品皂苷质量分数的测定：同标准曲线制作方法，在最大吸收波长处测定吸光度，从标准曲线中找出对应的质量浓度。总皂苷质量分数%=(样品液皂苷的质量浓度×样品液的体积/苦瓜粉末质量)×100%　　1.2.2洗脱液中总糖含量的测定洗脱液中总糖含量采用3,5二硝基水杨酸比色定糖法测定。采用无水葡萄糖配制标准溶液，制作标准曲线。于520nm波长处测吸光度值，以吸光度值为纵坐标，以葡萄糖标准浓度为横坐标绘制标准曲线。糖的标准曲线见图2(Y=2.9365X-0.1229,r=0.9984)。　　1.2.3洗脱液中蛋白含量的测定采用Folin酚法测定洗脱

7、液中蛋白质的浓度。以空白液为参比，在640nm处比色测定。以吸光度值为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标，绘制标准曲线见图3（Y＝0.0041X-0.0326，r=0.9967）。　　1.2.4苦瓜皂苷TLC［7］展开剂：氯仿甲醇水(65∶35∶10，5～10℃放置12h以上）的下层液为展开剂。显色剂：甲液取水25ml，缓慢加硫酸50ml，放冷后，再加乙醇25ml，摇匀；乙液：8%香草醛无水乙醇溶液。用时将5份甲液与1份乙液混合。临用现配，80℃烘至斑点清晰。　　2方法　　2.1树脂的筛选　　2.1.1大孔树脂的预处理先于吸附柱内加入相当于装填

8、树脂体积0.4～0.5倍的乙醇，然后将新树脂投入柱中，使其液面高于树脂上端3mm处，浸泡24h；用2倍柱体积(BV)乙醇，以2BV/h的流速通过树脂，并浸泡4～5h