山东产丹参遗传多样性的扩增片段长度多态性指纹分析

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1、山东产丹参遗传多样性的扩增片段长度多态性指纹分析作者：郝岗平,孙立彦,史仁玖,高允生,王健美【关键词】山东产丹参；,,遗传多样性；,,扩增片段长度多态性技术　　摘要：目的研究山东产丹参的遗传多样性，初步探讨扩增片段长度多态性（AFLP）分子标记技术在丹参道地性鉴别上的应用。方法采用扩增片段长度多态性（AFLP）技术对山东产15个丹参样本进行DNA多态性分析。结果利用4对引物组合构建了15个丹参样本的DNA指纹图谱，通过相似性和聚类结果分析，丹参和白花丹参样本的遗传相似性较低，聚类结果也划分为两大类群，证明它们之间的亲缘关系较远，分化明显。临沂地区的野生和栽培丹参样本聚在一类，且栽

2、培品种和野生品种之间具有一定的遗传差异。结论山东产丹参具有一定的遗传多样性，AFLP技术可用于丹参道地性鉴别。　　关键词：山东产丹参；遗传多样性；扩增片段长度多态性技术　　Abstract：ObjectiveTostudythegeicdiversityofSalviamiltiorrhizainShandongandtheapplicationofamplifiedfragmentlengthpolymorphism(AFLP)totheidentificationofnaturalherb.MethodsThepolymorphismsof15Salviamiltiorrhi

3、zaspecimensfromShandongiltiorrhizaspecimenserbinations.TheresultindicatedthatsimilarityofSalviamiltiorrhizaandiltiorrhizailtiorrhizailtiorrhiza.SalviamiltiorrhizafromLinyiiltiorrhiz.ConclusionGeicdiversityexistsbetiltiorrhizafromShandongandAFLPtechnologyhasprovidedusthemethodofstudyongenuinen

4、essofSalviamiltiorrhiza.　　KeyiltiorrhizafromShandong;Geicdiversity;AFLP　　扩增片段长度多态性技术（amplifiedfragmentlengthpolymorphism，AFLP）是一种20世纪90年代发展起来的DNA分子标记技术，具有RFLP的稳定性和RAPD的简便快捷性。同其他以PCR为基础的标记技术相比，AFLP技术能同时检测到大量的位点和多态性标记。因此AFLP技术不仅广泛用于植物、微生物的遗传多样性研究，而且在生物的基因作图、基因定位、连锁分析及亲缘关系鉴定等方面也有广泛的应用［1］。罗志勇等［2］

5、首次用AFLP技术构建了人参Panaxginseng.C.A.Mey.和西洋参Panaxquinquefolium.L.的DNA指纹图谱，具有丰富的多态性。这对于鉴别人参品种、真假人参等提供了非常有效的工具。虞泓等［3］应用AFLP技术分析石斛属4种植物的亲缘关系，说明AFLP技术可用于药用石斛DNA指纹图谱研究。丹参Salviamiltiorrhiza是我国传统中药,具有活血化淤、通经止痛的功能。现代药理研究表明丹参对心血管系统作用十分显著，已成为治疗冠心病最常用的中药之一。丹参的生态适应性强，在我国广泛分布于华北、华东、中南西北、西南部分省区也有分布。随着野生资源的减少，20

6、世纪70年代中期丹参已经供不应求，在全国许多地区都开始栽培，目前栽培品已成为丹参的主要来源。黄秀兰等［4］对不同产地的丹参所含有效成分丹参酮ⅡA进行了测定，实验结果表明山东产的丹参丹参酮ⅡA的含量最高，属于丹参的道地产区。目前，国产栽培丹参长期采用无性繁殖，品种混杂，严重退化，商品质量和产量极不稳定，已成为国产丹参出口创汇和生产质量管理规范(GAP)研究的“瓶颈”。因此开展科学的丹参资源鉴定研究对于丹参的临床药用及中药现代化事业的发展具有重大意义。郭宝林等［5］利用RAPD方法对丹参主要居群的遗传关系及药材道地性进行了初步研究，结果显示，丹参居群内遗传多样性十分丰富，山东和河南产

7、的丹参可以认为是丹参的道地药材。目前国内外还没有采用其它分子标记技术研究丹参居群与道地性的报道，尤其在山东丹参种质资源的分子鉴定研究方面更是空白。为了寻找鉴定丹参类药材和山东产药材的道地性的新方法，本研究采用AFLP技术对山东产丹参进行了基因组DNA多态性分析，并结合聚类分析探讨了供试类群的亲缘关系，说明AFLP技术可用于山东产丹参的DNA分子指纹图谱构建，为进一步研究山东丹参的道地性，合理利用和保护山东丹参属药用资源奠定基础。　　1材料与方法　　1.1材料所用植物材料为2005