山茱萸总苷分离纯化工艺研究

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1、山茱萸总苷分离纯化工艺研究作者：李小娜　吕立勋　周洁　徐海燕　陈苹苹【摘要】目的应用大孔吸附树脂对山茱萸中环烯醚萜苷类成分进行分离纯化，考察大孔树脂纯化山茱萸总苷的工艺参数。方法考察上样量、洗脱剂浓度、洗脱体积、上样浓度等因素对HPD-100大孔吸附树脂纯化山茱萸环烯醚萜苷的影响。以洗脱液中莫诺苷和马钱苷含量作为考察指标，用HPLC法测定其含量，确定最佳工艺参数。结果洗脱溶剂应为50%乙醇，大孔树脂每使用两次需要再生1次，最佳上样浓度为0.25g/ml，洗脱溶剂的用量为8倍的吸附原液体积，吸附容量为10ml。结论采用

2、大孔树脂分离纯化的山茱萸总苷可用于制备环烯醚萜苷制剂。【关键词】山茱萸总苷；大孔吸附树脂；高效液相色谱法；纯化　　Abstract：ObjectiveTostudythetechnologicalparametersofpurificationoftotalglycosidefromCornusofficinalisacroporousresin.MethodsThesamplevolume,elutionconcentration,volumeandsampleconcentrationorronisideandl

3、oganinbyHPLCmethods．ResultsElutingsolventacroporousresinusedtpleconcentrationl,thevolumeofelutingsolventestheofvolumeofsamplesolution,theabsorptioncapacityl.ConclusionIridiodglycosidecanbepurifiedbymacroporous．Itisafeasiblemethodtoproducepreparation．　　Keyusoffi

4、cinalis;Macroporousresin;HPLC;Purification　　山茱萸总苷(TotalglucosidesfromCornusofficinalis，TGC)为中药山茱萸的主要药效部位，包括马钱苷（loganin）、莫诺苷（morroniside）、獐牙菜苷、马鞭草苷、山茱萸新苷等十余种环烯醚萜苷，已经证实能够降血糖并对糖尿病心脏和肾病病变有一定的保护作用［1～3］，有抗炎、免疫抑制作用［4～6］，对阿尔采末病和脑梗塞有治疗作用［7～8］。大孔吸附树脂对单味中药提取物中苷类、黄酮、生物碱的分离

5、纯化效果良好［9，10］。本工艺应用大孔吸附树脂对山茱萸中环烯醚萜苷类成分进行分离纯化，并考察大孔树脂纯化山茱萸总苷的参数。　　1仪器与试药　　1.1仪器　　Agilent1100Series高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；KDC-16H高速型离心机（科大创新股份有限公司中佳分公司）；BT125D十万分之一天平（塞多利斯精密科学仪器有限公司）；HEIdolph2旋转蒸发仪。　　1.2药品与试剂　　山茱萸药材购于唐山市医药药材公司；马钱苷、莫诺苷对照品（自提取、精制，经1H-NMR和13C-NMR确定为马钱苷和莫

6、诺苷，归一化法测定含量大于99.3%）；HPD-100大孔树脂（沧州宝恩化工有限公司）；甲醇为色谱纯（FisherChemAlert），其余试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。　　2方法与结果　　2.1山茱萸吸附原液的制备　　称取山茱萸粉（40目）200g，加8倍量30％乙醇浸泡过夜，回流提取2次，1h/次，过滤，合并滤液，滤液回收乙醇，浓缩制成每毫升相当于0.25g生药的溶液，静置，滤过，即得山茱萸吸附原液，4℃保存备用。　　2.2大孔吸附树脂预处理与再生　　大孔吸附树脂一般含有未聚合的单体及残留溶剂，使用前须先行除去。

7、树脂用95%乙醇浸泡24h，倾去上浮物后湿法装柱，用乙醇洗至流出液与水混合不呈现白色乳浊现象即可，然后以大量蒸馏水洗净柱中乙醇，水浸泡备用；再生时用90％乙醇洗脱至流出液无色，以大量水洗去乙醇即可。如果树脂颜色较深，用0.1mol/L氢氧化钠溶液浸泡2h，用水洗至中性，再加0.1mol/L盐酸溶液浸泡2h，用水洗至中性，最后用95%乙醇洗至洗脱液与等体积水混合不浑浊，用蒸馏水洗至无醇，备用。　　2.3山茱萸总苷中莫诺苷和马钱苷的含量测定　　2.3.1色谱条件　　色谱柱为DiamonsilC18色谱柱（250mm×4.

8、6mm，5μm）；流动相为甲醇-水溶液梯度洗脱，洗脱剂甲醇在0～8min为32%，在8～15min为32%～36%，在15～20min为36%；柱温为室温；流速1ml/min；检测波长237nm；进样量20μl。　　2.3.2标准曲线与线性范围　　配制莫诺苷和马钱苷的系列对照品溶液，20μl进样分析。以莫诺苷和马钱苷的峰面积（Y）为纵坐标，莫诺