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1、神奇灵颗粒剂中总蛋白含量测定的方法学研究作者:王全喜,王一飞,杨珂,黄园【摘要】目的对神奇灵颗粒剂中的总蛋白含量进行测定,建立一种测定食品、药品测定蛋白含量的方法学。方法对样品过滤后,采用双缩脲法、Folin酚试剂法,以牛血清白蛋白做为对照品,测定吸光度,并做精密度、样品重现性、加样回收实验。结果双缩脲法快速、简便,得到样品的含量为47.21%,精密度实验RSD=0.20%(n=6),样品重现性好,RSD=0.99%(n=6),平均回收率为96.67%,RSD=0.45%(n=6);两种方法测定之间有差异。结论所采用方法可作为蛋白含量比较高的食品、药
2、品制剂中蛋白含量的测定。【关键词】神奇灵颗粒剂;蛋白;双缩脲法;Folin酚试剂法 Abstract:ObjectiveTodeterminetotalprotEininShenqilinggranules,andestablishthemethodologytoassayprotEInlevelinfoodsanddrugs.MethodsAfterfilteringthesamples,takebovineserumalbuminascontrolarticle,usebiuretmethod,Folin-loinetheabsorbance,
3、andthendothetestsforprecision,reproducibility,averagerecovery.ResultsThebiuretmethodisfastandconvenient.Theaveragecontentofthesamplesent,RSD=0.20%(n=6).TheabsorbancereproducibilityofthesamplesenthodandFolinloethodinthispapercanbeusedfordeterminingproteinl水,搅拌下加入含30g氢氧化钠的溶液,定容至1
4、000ml,加入碘1g备用。 2.1.2标准品试液的制备 精密称量0.4009gBSA,准确加入20ml纯水超声溶解15min,作为标准品试液。 2.1.3标准曲线的绘制 精密量取标准品试液0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5ml分置于试管中,用水补足1ml,加入双缩脲试剂各4ml,漩涡混合器混匀,常温下显色30min后,依紫外分光光度法540nm下检测吸光度值,以空白调零。最后以各管中蛋白含量(mg/ml)为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。结果见表1。表1标准曲线的绘制(略)回归方程:y=0.0466x+0.0043,r=0.9
5、996,符合《中国药典》2005版Ⅰ部对吸光度的要求,且相关性良好。 2.1.4精密度实验 取样标准品试液6份,每份0.3ml,加水补足1ml,以标准曲线制备过程测定吸光度值,计算均值及RSD。表2精密度实验(略) 2.1.5供试品试液的制备与测定 取一定量的本品,研细,精密称量0.4012g,加水超声15min溶解,过滤,定容至25ml,取1ml,照标准曲线项下的方法,自“加入双缩脲试剂各4ml………”起,依法测定吸光度,按标准曲线计算蛋白质的含量。 2.1.6重现性实验 分别精密称量6份本品,依供试品的测定方法,计算蛋白质的含量,计算均
6、值及RSD。表3重现性实验(略)样品平均含量为47.21%,RSD=0.99%,n=6。说明该法测定该样品误差范围小,方法切实可行。 2.1.7加样回收实验 分别精密称量6份已知含量的本品,加入一定量的标准品试液,同供试品的方法定溶于25ml水制备,测定吸光度值,计算平均回收率,RSD。表4加样回收实验(略)平均回收率为96.67%,RSD=0.45%,n=6。说明双缩脲法以及样品处理的过程中损失比较小。 2.2Folin-酚试剂法 2.2.1试剂的制备取2g碳酸钠,0.8g氢氧化钠溶解于100ml水中;取1g硫酸铜溶解于100ml水中;取2g
7、酒石酸钾钠溶解于100ml水中。 2.2.2方法与结果 临用前取①100ml,②1ml,③1ml混匀作为甲试剂,测定时加入甲试剂5ml混匀静置10min后加入0.5ml乙试剂混匀静置30min,500nm下测定吸光度值。标准品为0.5mg/ml的BSA。结果见表5。表5Folin-酚试剂法标准曲线的制备(略) 3讨论 3.1双缩脲试剂配制过程中,加入氢氧化钠时应适当搅拌,防止产生氢氧化铜的沉淀,影响显色效果,而且应做到使用前配制,不易长期存放。 3.2从表2~3中可以看出,双缩脲法能准确地测定标准蛋白含量,而且变异系数比较小,稳定可靠,重现性
8、好,得到神奇灵颗粒剂中的总蛋白含量为47.21%,这与理论上的值偏小,一方面可能是因为所加乳清
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